基于细胞阻抗的实时细胞过程监测分析

0 次观看3:52 分钟 • July 8th, 2025

为了利用实时细胞分析(RTCA)连续测量细胞行为,需获取一种RTCA微孔板,其孔底嵌有用于阻抗检测的金微电极阵列。小心地将细胞培养基加入各孔中。

在导电介质中,于微电极两端施加微弱电势。该电势促使电流在微电极之间流动,从而实现对基线阻抗——即介质固有电阻——的测量。 

用移液器将所需浓度的哺乳动物细胞悬液加入含培养基的孔中。让细胞在孔内均匀分布。

孵育期间,细胞会贴附在孔底。  贴壁细胞在微电极上起到绝缘体作用,限制电流通过,从而增加阻抗。

细胞逐渐在微电极上增殖,导致阻抗呈指数级增加。

细胞层汇合形成后,细胞因营养缺乏而发生死亡。随后,细胞从微电极上脱落,导致阻抗下降。

持续的阻抗测量可实现对细胞增殖和死亡等细胞事件的实时监测。

为了确定细胞感染所需的合适细胞数量,按照所示方法,在37摄氏度下用每瓶3毫升的0.25%胰蛋白酶-EDTA孵育45分钟,消化前用PBS洗涤细胞,制备培养24小时、融合度约80%的MDCK细胞培养物。

当细胞脱落后,每瓶加入 7 毫升新鲜培养基终止反应,并对每种培养物中的细胞进行计数。将细胞稀释至每毫升细胞培养基含 4 × 105 个细胞,并按指示对细胞进行连续两倍稀释。

将E-plate置于室温下数分钟,然后向每个孔中加入100 µL细胞培养基,注意不要触碰E-plate的电极。解锁支架,将板的前端插入阻抗测量仪的支架槽中。关闭培养箱门,然后打开软件。

“默认实验模式设置”中,选中所需的卡槽,然后双击页面顶部以输入实验名称。点击“布局”,并为所选板孔中的每一个输入必要的样品信息。点击“时间表” | “步骤” |,然后点击“添加步骤”。软件将自动添加一个1秒的步骤,用于测量背景阻抗。

单击“执行”“开始/继续”。单击“绘图”“添加”以选择适当的孔,确认背景阻抗在-0.1至0.1之间,然后进入下一步。

接下来,从底座中取出培养板,将每种细胞悬液各100 µL以复孔形式加入相应的孔中。将E-板置于超净工作台中,室温下静置30分钟,以使细胞均匀分布于各孔底部,然后再将E-板放入底座卡槽中。单击“计划”和“添加步骤”,设置每30分钟监测一次细胞,共重复200次,然后选择“开始/继续”

为了检查并绘制细胞阻抗数据,单击“绘图”,并选择接种后24小时、即将进入平台期之前的细胞浓度,以确保在病毒感染时细胞仍处于生长阶段。

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最后更新:29 八月 2026