0 次观看 • 3:52 分钟 • July 8th, 2025
为了利用实时细胞分析(RTCA)连续测量细胞行为,需获取一种RTCA微孔板,其孔底嵌有用于阻抗检测的金微电极阵列。小心地将细胞培养基加入各孔中。
在导电介质中,于微电极两端施加微弱电势。该电势促使电流在微电极之间流动,从而实现对基线阻抗——即介质固有电阻——的测量。
用移液器将所需浓度的哺乳动物细胞悬液加入含培养基的孔中。让细胞在孔内均匀分布。
孵育期间,细胞会贴附在孔底。 贴壁细胞在微电极上起到绝缘体作用,限制电流通过,从而增加阻抗。
细胞逐渐在微电极上增殖,导致阻抗呈指数级增加。
细胞层汇合形成后,细胞因营养缺乏而发生死亡。随后,细胞从微电极上脱落,导致阻抗下降。
持续的阻抗测量可实现对细胞增殖和死亡等细胞事件的实时监测。
为了确定细胞感染所需的合适细胞数量,按照所示方法,在37摄氏度下用每瓶3毫升的0.25%胰蛋白酶-EDTA孵育45分钟,消化前用PBS洗涤细胞,制备培养24小时、融合度约80%的MDCK细胞培养物。
当细胞脱落后,每瓶加入 7 毫升新鲜培养基终止反应,并对每种培养物中的细胞进行计数。将细胞稀释至每毫升细胞培养基含 4 × 105 个细胞,并按指示对细胞进行连续两倍稀释。
将E-plate置于室温下数分钟,然后向每个孔中加入100 µL细胞培养基,注意不要触碰E-plate的电极。解锁支架,将板的前端插入阻抗测量仪的支架槽中。关闭培养箱门,然后打开软件。
在“默认实验模式设置”中,选中所需的卡槽,然后双击页面顶部以输入实验名称。点击“布局”,并为所选板孔中的每一个输入必要的样品信息。点击“时间表” | “步骤” |,然后点击“添加步骤”。软件将自动添加一个1秒的步骤,用于测量背景阻抗。
单击“执行”和“开始/继续”。单击“绘图”和“添加”以选择适当的孔,确认背景阻抗在-0.1至0.1之间,然后进入下一步。
接下来,从底座中取出培养板,将每种细胞悬液各100 µL以复孔形式加入相应的孔中。将E-板置于超净工作台中,室温下静置30分钟,以使细胞均匀分布于各孔底部,然后再将E-板放入底座卡槽中。单击“计划”和“添加步骤”,设置每30分钟监测一次细胞,共重复200次,然后选择“开始/继续”。
为了检查并绘制细胞阻抗数据,单击“绘图”,并选择接种后24小时、即将进入平台期之前的细胞浓度,以确保在病毒感染时细胞仍处于生长阶段。
本文介绍了一种利用实时细胞分析(RTCA)连续测量细胞行为的方法。该技术通过监测细胞培养物中阻抗的变化来评估细胞增殖与死亡。
实时阻抗监测可实现对细胞动态的连续、无标记评估,为早期靶点验证提供有关增殖和细胞毒性的预测性洞察。该方法通过提供定量且可重复的数据,支持机制层面的风险评估,从而指导先导化合物筛选和临床前工作流程中的决策。该技术可在进入资源密集型下游应用之前,降低疾病相关体系中的生物学不确定性,从而提升研发组合的相关性。
实时阻抗监测贯穿从早期靶点验证、先导化合物筛选到临床前评估的整个发现过程,能够对细胞事件提供动力学解析,从而支持各个阶段的数据驱动决策。
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最后更新:29 八月 2026