基于阻抗的细胞检测法测定流感病毒感染复数

流感病毒感染过程中，病毒通过内吞作用进入细胞，劫持宿主细胞的生物合成机制，产生子代病毒颗粒。这些病毒颗粒被释放后，会感染邻近细胞，引发感染的级联反应。

为了测定培养物中感染性流感病毒与细胞的比例——即感染复数——需将适当密度的新鲜哺乳动物细胞悬液加入微孔板中。

该培养板含有嵌入孔底的金质微电极，用于测量阻抗。孵育，使细胞贴附于孔底，并在感染前进入指数生长期。

在微电极之间施加一个微小的电势。黏附在微电极上的细胞起到绝缘体作用，限制电流通过，从而增加电阻——即阻抗，并对其进行测量。

移除培养基。用移液器将流感病毒悬液加入孔中。补充适量的丝氨酸内切蛋白酶。

孵育过程中，丝氨酸内切蛋白酶切割并激活病毒糖蛋白血凝素，促进其与特定宿主细胞受体结合，进而实现病毒进入细胞。

利用宿主细胞的机制，新病毒颗粒被产生并释放，感染邻近细胞。因此，受病毒感染的细胞发生形态学改变，并表现出细胞病变效应，导致细胞死亡——细胞从微电极表面脱落，随时间推移阻抗降低。

测定阻抗降至病毒添加前初始阻抗一半所需的时间。时间越短，表明病毒感染复数越高。

为了确定CIT₅₀值与感染复数之间的相关性，在将3 × 10⁴个 freshly split MDCK细胞接种于电子微孔板每孔中培养24小时后，每孔每次用100微升新鲜病毒增殖培养基洗涤细胞两次，并使用单通道移液器向每孔加入100微升病毒悬液。

当所有病毒稀释液添加完毕后，轻柔地将培养板放入仪器中35摄氏度的托架槽内，并按照演示方法，至少持续监测细胞阻抗100小时，每15分钟记录一次数据。

完成两轮测量后，点击“暂停”仪器，将E-板从支架中取出。向每个孔中加入100 µL含有TPCK-胰蛋白酶的病毒增殖培养基，然后将E-板放回支架卡槽中。随后，开始分析。