基于细胞阻抗的病毒存活动力学检测方法

病毒与宿主细胞受体结合，并内化进入内体。内体膜与病毒膜融合，将病毒内容物释放到细胞内。

病毒基因组进入细胞核后转录为mRNA，随后翻译形成病毒蛋白。病毒组分进入细胞质并组装成病毒粒子，病毒粒子从细胞膜出芽释放，引起细胞病变效应——即宿主细胞形态的改变及细胞死亡。

为了通过测量宿主细胞阻抗来评估病毒存活动力学，取底部涂有阻抗测量微电极的多孔板。向各孔中加入宿主细胞悬液，并进行孵育，使细胞贴附于电极表面并生长。

接下来，取经生理盐水预处理的、含有不同病毒载量的病毒悬液。生理盐水处理可为病毒提供氯离子，从而生成次氯酸，杀死病毒，降低其感染性。将这些病毒悬液分别加入对应的孔中。

通过贴壁细胞测量细胞阻抗——即细胞对电极中电流流动的阻碍现象。

病毒会感染贴壁的宿主细胞并改变其形态，导致形态改变的细胞从电极上脱落。随着时间推移，感染的细胞越来越多，由宿主细胞介导的细胞阻抗逐渐降低。

绘制细胞指数随时间的变化曲线，该指数反映了因感染细胞脱落导致的阻抗变化。

为评估甲型流感病毒的存活动力学，将氯化钠加入蒸馏水中，使其终浓度为每升35克，取900微升所得盐溶液加入2毫升冻存管中。向每支冻存管中加入100微升病毒原液，并将冻存管置于35摄氏度的培养箱中，孵育适当的实验时间。

在培养结束前一日，将3 × 10⁴个新分裂的MDCK细胞以每孔100微升病毒增殖培养基接种于16孔微孔板中，每孔一孔，并重复操作步骤，以测定背景阻抗并确保细胞均匀分布于孔底。随后，在37摄氏度及5%二氧化碳条件下培养细胞24小时。

第二天，将细胞洗涤两次，然后按照图示，用新鲜培养基稀释10倍的生理盐水蒸馏病毒液100微升感染细胞，并每15分钟监测一次细胞阻抗，持续至少100小时。