硫代巴比妥酸反应物测定法评估人血清中的氧化应激

细胞在代谢过程中会产生少量自由基。

在病理条件下，自由基过度产生，导致氧化应激。这些自由基攻击细胞膜磷脂中的多不饱和脂肪酸，该过程称为脂质过氧化。此过程会生成有毒的氧化产物，包括脂质氢过氧化物和丙二醛（MDA），从而引起膜损伤和细胞死亡。

检测人血清中的氧化应激 体外 使用硫代巴比妥酸反应物质（TBARS）检测法，从含有经氧化诱导化合物处理的人血清的试管开始。处理后的血清主要包含脂质过氧化产物——丙二醛（MDA）和脂质氢过氧化物——以及磷脂、脂质和蛋白质。

接下来，加入十二烷基硫酸钠（SDS）并混匀，以溶解脂质并释放丙二醛（MDA）。SDS 可使任何污染的蛋白质变性。随后加入适当的酸性缓冲液，再加入酸性硫代巴比妥酸（TBA）。在高温下孵育。

在酸性条件和高温下，TBA 分子与 MDA 反应，形成稳定的红粉色 MDA-TBA 复合物，称为 TBARS。将样品置于冰上孵育，以终止反应并稳定已形成的复合物。

离心。收集含MDA-TBA的上清液，并转移至多孔板中。使用微孔板读板仪测定该复合物的吸光度。

吸光度越高表明TBARS浓度越高，提示血清中脂质过氧化产物和氧化应激水平越高。

标记待分析样品的玻璃管，然后向每根管中加入100 µL制备好的样品。向每个样品中加入200 µL 8.1% SDS，轻轻旋转混匀玻璃管。

向每个样品中加入1.5毫升3.5摩尔的醋酸钠缓冲液。然后，加入1.5毫升0.8%硫代巴比妥酸水溶液。通过加入700微升去离子水，将每支试管中的终体积调至4毫升。盖紧玻璃试管，置于设定为95°C的加热块中孵育1小时。用铝箔包裹试管以防止冷凝。随后，将试管从加热块中取出，并在冰上孵育30分钟。

孵育结束后，将样品和标准品在4摄氏度下以1,500 × g 离心10分钟。用移液枪头吸取各管中的150微升上清液转移至96孔板的孔中，并用枪头去除气泡。

在532纳米处测定各样品的吸光度。然后，从所有其他样品的吸光度读数中减去空白样品的平均吸光度读数。

创建标准曲线，并利用其计算未知样品的浓度。