原代单核细胞体外培养及向巨噬细胞的分化

单核细胞是一种免疫细胞，可分化为巨噬细胞和抗原呈递的树突状细胞，以防御感染。

培养单核细胞并诱导其分化 体外 首先，取适量悬浮于合适培养基中的人原代单核细胞。将细胞悬液加入培养板的孔中，在生理条件下孵育，以使细胞贴壁。

向一个孔中加入诱导分化的细胞因子——粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF），向另一个孔中加入巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）。孵育适当时间。

GM-CSF 与细胞上的异源二聚体受体结合，诱导单核细胞分化。GM-CSF 的结合可激活细胞内信号通路，进而促进基因表达，使细胞向M1型巨噬细胞样表型极化。

M1样细胞——呈圆形、胞质体积较大的细胞——具有促炎作用，并有助于防御感染。

在另一个孔中，M-CSF 与其在单核细胞上的同源二聚体受体结合，诱导细胞发生分化。M-CSF 的结合会激活与 GM-CSF 不同的细胞内信号通路，从而促进基因表达，使细胞向 M2 型巨噬细胞样表型极化。

M2样细胞呈长梭形，具有抗炎作用，并表现出组织重塑和修复功能。

分化后的巨噬细胞已准备好进行后续下游实验。

计数后，在生物安全柜中，将分离得到的单核细胞重新悬浮于含抗生素的37 °C无血清RPMI 1640培养基中，细胞密度为1×10⁶个细胞/毫升，并将1毫升重悬细胞接种至35毫米培养皿中。随后，将培养皿置于细胞培养箱中孵育30至60分钟，使细胞贴附于培养皿底部。

为诱导具有M1样表型的巨噬细胞，向每孔中加入含25纳克/毫升GM-CSF的100微升胎牛血清。为诱导具有M2样表型的巨噬细胞，向每孔中加入含50纳克/毫升M-CSF的100微升胎牛血清。