从人血沉棕黄层中分离外周血单个核细胞

外周血单个核细胞（PBMCs）由多种特化的免疫细胞组成，包括淋巴细胞、单核细胞和树突状细胞。

为了分离PBMC，首先取一支含有新鲜获取的人外周血富集层的试管。该富集层血液中含有PBMC，以及具有多叶核的粒细胞、红细胞和悬浮在血浆中的血小板。

将淋巴细胞分离液按所需比重精确配制，其比重应最适合外周血单个核细胞的分离，然后小心地将等体积的血浆层悬浮液覆盖于该密度梯度液上。

离心过程中，不同类型的细胞根据其密度相对于梯度介质的差异而分离成不同的层。此外，密度梯度介质中的多糖可促进红细胞聚集和沉降。 

密度较高的红细胞和粒细胞沉降到试管底部，而密度最低的血浆则形成最上层。外周血单个核细胞（PBMCs）的密度低于密度梯度介质，因此在血浆与密度梯度介质的界面处形成一层浑浊的白色层。

移除上层血浆层。小心收集含有外周血单个核细胞（PBMCs）的浑浊层，并将其转移至含有无血清培养基的新离心管中。离心以沉淀PBMCs。弃去含有血小板和残留梯度介质的上清液。

用新鲜培养基重悬PBMCs，并用于后续分析。

为了从人供体的血沉棕黄层中分离外周血单个核细胞（PBMC），使用移液管沿50毫升离心管管壁缓慢将15毫升血沉棕黄层血液叠加到15毫升密度梯度分离液上，通过离心分离细胞。用无菌巴斯德吸管移除上层血浆层，并小心地将单个核细胞层转移至新的50毫升离心管中。

向细胞中加入无血清的RPMI培养基，调整终体积至50毫升，轻轻倒置离心管数次后离心。然后，用20毫升无血清培养基重悬细胞，进行计数。