从单核细胞生成未成熟、成熟及耐受性树突状细胞

为了引发免疫反应，树突状细胞（DCs）会通过MHC II类分子以及共刺激分子CD80和CD86呈递抗原。根据免疫反应特性，树突状细胞可分为未成熟型、成熟型和耐受性DCs。

生成多种树突状细胞亚群 体外从含有生长因子和细胞因子IL-4（一种信号分子）的完全培养基中的人单核细胞——免疫前体细胞——开始，使用多孔板进行实验。

将细胞孵育较长时间。生长因子和IL-4可诱导单核细胞增殖并分化为未成熟树突状细胞。

未成熟的树突状细胞具有模式识别受体（PRRs），且MHC II类分子和共刺激分子表达水平较低，因此激发免疫应答的能力较弱。

用免疫调节剂——维生素D3和糖皮质激素处理一个含有未成熟树突状细胞（DC）的孔。这些免疫调节剂可下调MHC II类分子和共刺激分子的表达，从而诱导其分化为耐受性树突状细胞（tolerogenic DCs）——一类能够防止过度或不良免疫反应的免疫调节细胞。

用脂多糖（LPS）处理另一孔未成熟树突状细胞（DCs），LPS作为一种抗原。LPS与细胞的Toll样受体4（TLR-4，一种PRR）相互作用，启动信号级联反应，并诱导其分化为成熟细胞。这些细胞高表达MHC II类分子、共刺激分子和PRR，能够高效地进行抗原加工和呈递。

观察经不同处理的孔，以识别代表树突状细胞亚型的不同形态学特征。

将四组 CD14+ 单核细胞以每毫升细胞培养基含 0.3 至 0.5 × 10⁶ 个细胞的浓度接种于六孔板中，并加入 IL-4。将细胞置于 37 摄氏度、含 5% CO₂ 的组织培养孵箱中孵育。第 4 天，从培养物中移除 850 微升培养基，并进行离心。

吸弃上清液，将沉淀物重悬于1毫升细胞培养基中。将细胞混合物加回培养体系。在第5天，向其中两组培养体系中每毫升培养基加入1微升维生素D3储备液和1微升地塞米松储备液，以诱导生成耐受性moDCs。

第6天，向所有组中加入200纳克/毫升的GM-CSF和200纳克/毫升的IL-4。向其中一组仅用GM-CSF和IL-4处理的样本中加入1微克/毫升的LPS，以诱导生成成熟的moDCs。

向一组耐受性 moDC 中加入终浓度为 1 微克/毫升的 LPS，以生成 LPS 耐受性 moDC。最后，在第 7 天，用 PBS-EDTA 冲洗培养皿以收获不同类型的 moDC。