基于流式细胞术的细胞分选,适用于不同的循环 B 细胞群

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根据其细胞表面受体,人循环B细胞分为CD19阳性幼稚B细胞、CD19和CD27阳性记忆B细胞以及CD19、CD27和CD38阳性浆母细胞浆细胞。

要对这些细胞群进行分类,请取纯化的 B 细胞悬液。与人免疫球蛋白 G 抗体一起孵育。这些抗体阻断 B 细胞的 Fc 受体,阻止非特异性抗体结合。

添加靶向 CD19、CD27 和 CD38 的荧光标记抗体。

抗 CD19 抗体与 B 细胞上普遍表达的 CD19 受体结合。

抗 CD27 抗体与记忆 B 细胞和浆母细胞浆细胞上表达的 CD27 受体结合。

抗CD38抗体与浆母细胞浆细胞上表达的CD38受体结合。

添加荧光 DNA 结合染料作为死细胞标记物。

死细胞表现出膜完整性的丧失,允许染料进入细胞并与双链 DNA 结合;活细胞保持未染色。

心以去除未结合的抗体和染料,并将细胞重悬于 FACS 缓冲液中。通过过滤器过滤细胞以获得均匀的悬浮液并消除团块。

使用流式细胞仪,将死细胞与活细胞进行分类。在活细胞内,CD19、CD27 和 CD38 表达可区分幼稚 B 细胞、记忆 B 细胞和浆母细胞浆细胞。

进行非特异性封闭后,将每 1 x 106 个细胞 1 微克每种选择抗体加入试管中,轻轻混合,在冰上孵育 30 分钟。在孵育的最后五分钟内,向细胞中加入5微升7-AAD。然后,向细胞中加入 2 毫升新鲜 PBS,并在离心前涡旋。

沉淀以每毫升浓度1至5 x 107个细胞重悬于新鲜分选缓冲液中,并通过40微米细胞过滤器将细胞过滤到新的5毫升聚苯乙烯管中。然后,通过流式细胞术将细胞分选到三个含有5毫升新鲜RPMI培养基的15毫升管中,以收集幼稚B细胞,记忆B细胞和浆母细胞浆细胞。

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Last updated: 18 July 2026