来自外周血单核细胞的自然杀伤细胞的离体扩增

自然杀伤细胞 NK 是消除肿瘤和微生物感染的大颗粒淋巴细胞。

对于离体NK细胞扩增，取外周血单核细胞（PBMC）悬浮液，其中含有异质淋巴细胞群，包括NK细胞。添加辐照的饲养细胞（非增殖淋巴母细胞样细胞），这些细胞表达激活和扩增 NK 细胞所需的膜结合白细胞介素 21 （mIL-21）。

共培养物添加到底部有透气膜的专用培养孔中，允许气体交换。细胞在不需要传代的情况下长时间沉降和增殖。

添加白细胞介素 2、IL-2 和白细胞介素 15、IL-15 — 用于 NK 细胞增殖的细胞因子。在生理条件下孵育足够的时间。

饲养层细胞上的 mIL-21 与 NK 细胞上的特定异二聚体受体结合。外源性 IL-15 和 IL-2 与各自的受体结合。这种结合诱导不同的下游信号通路——激活基因表达——限制细胞衰老并导致延长 NK 细胞增殖。

使用流式细胞术，定期评估NK细胞扩增。

记录的数据以分析细胞的扩增速率及其纯度 - 目标 NK 细胞类型的选择性生长。孵育期内的流形膨胀表明在保持高纯度的同时持续增殖。

10毫升R-10培养基以400g离心5分钟，分别洗涤外周血单核细胞或PBMC和100个γ射线照射的221-mIL-21细胞。

离心后，保存 1 x 10⁶ PBMC 用于流式细胞术，并将 5 x 10⁶ PBMC 与 10 x 10⁶ 100 γ 射线照射的 221-mIL-21 细胞混合在特殊的 6 孔板中。将30毫升补充有人白细胞介素-2和人白细胞介素-15的R-10培养基加入同一6孔板中，并将板与5%二氧化碳在37摄氏度下孵育，每三到四天更换一次培养基。

在孵育期间，记录外周血自然杀伤总数或PBNK细胞数量、活力，并每三到四天进行一次流式细胞术以计算NK细胞扩增率。