从外周血单个核细胞中进行自然杀伤细胞的体外扩增

自然杀伤细胞（NK细胞）是能够清除肿瘤和微生物感染的大颗粒淋巴细胞。

对于 离体 NK细胞扩增，取含有包括NK细胞在内的多种淋巴细胞的外周血单个核细胞（PBMCs）悬液。加入经照射的 feeder 细胞——即不增殖的淋巴母细胞样细胞——其表达膜结合型白细胞介素21（mIL-21），该因子可激活并促进NK细胞扩增。

将共培养物加入底部带有透气膜的专用培养小室中，以允许气体交换。细胞可在较长时间内沉降并增殖，无需传代。

加入白细胞介素2（IL-2）和白细胞介素15（IL-15）——用于自然杀伤细胞增殖的细胞因子。在生理条件下孵育适当时间。

饲养细胞上的mIL-21与NK细胞上的特异性异源二聚体受体结合。外源性IL-15和IL-2分别与其相应的受体结合。这些结合可激活不同的下游信号通路——促进基因表达，抑制细胞衰老，从而导致NK细胞长期增殖。

采用流式细胞术，定期评估自然杀伤细胞的扩增情况。

绘制记录的数据以分析细胞的扩增速率及其纯度——即靶向NK细胞类型的特异性生长。在培养期间显著的扩增倍数表明细胞持续增殖的同时保持了高纯度。

将外周血单个核细胞（PBMCs）和100个经γ射线照射的221-mIL-21细胞分别用10毫升R-10培养基在400 g 离心5分钟进行洗涤。

离心后，保留 1 × 10⁶ 个 PBMC 用于流式细胞术分析，将 5 × 10⁶ 个 PBMC 与 10 × 10⁶ 个经伽马射线照射的 221-mIL-21 细胞混合于特制的 6 孔板中。向同一 6 孔板中加入 30 毫升添加了人白细胞介素-2 和人白细胞介素-15 的 R-10 培养基，在 37 °C、5% 二氧化碳条件下培养，每 3 至 4 天更换一次培养基。

孵育期间，每隔三至四天记录外周血总自然杀伤细胞（PBNK细胞）数量、细胞活力，并进行流式细胞术分析，以计算NK细胞扩增率。