从小鼠牙齿组织块中分离牙龈免疫细胞网络

牙龈，即牙龈组织，包绕牙齿的颈部区域以及颌骨。

牙龈组织由上皮层构成，该上皮层通过富含IV型胶原的基底膜与下方的结缔组织分隔。牙龈结缔组织中含有免疫细胞网络，包括淋巴细胞、肥大细胞和中性粒细胞，可保护牙龈免受感染。

为了分离牙龈免疫细胞网络，取含有牢固附着牙龈组织的小鼠牙齿组织块，用含有IV型胶原酶和DNase的酶混合液处理组织块。

胶原酶进入组织，降解IV型胶原，破坏基底膜和牙龈上皮，导致牙龈与牙齿分离。同时，脱氧核糖核酸酶降解DNA污染物。向试管中加入螯合剂，以去除二价阳离子并防止细胞聚集。

将消化后的牙块转移至含有DNase培养基的培养皿中。从牙块中分离牙龈组织，并将其转移至细胞筛中。

使用研杵研磨组织。这种机械解离可破坏牙龈结缔组织层，从而释放组织中的免疫细胞。用培养基冲洗滤网，并收集滤液中释放的细胞。

离心滤液，使细胞形成沉淀，弃去含有残留酶和碎片的上清液。将携带免疫细胞的细胞群体重悬于完全培养基中，以备后续分析。

去除牙龈边缘的多余组织，将上颌和下颌组织块转移至含有5毫升胶原酶和DNase并置于冰上的50毫升锥形管中。在37摄氏度下于摇床培养箱中消化组织1小时，在最后5分钟加入50微升0.5摩尔EDTA。然后向组织中加入5毫升冷的DNase培养基，轻轻旋转混匀管内物质。接着，将四块组织转移至培养皿中，并用500微升新鲜DNase培养基覆盖。

使用手术刀从每块组织上剥离牙龈组织，并将培养皿中的全部内容物转移至置于50毫升离心管上方的70微米细胞筛网上。用3至5毫升新鲜DNase培养基冲洗培养皿和细胞筛网，然后使用无菌3毫升注射器的推杆将牙龈组织在筛网网孔上研磨。用30至35毫升冷的DNase培养基冲洗筛网，离心滤液。随后，将沉淀重悬于1毫升完全培养基中，并测定活细胞数量。