发育研究的窗口鸡蛋
October 1st, 2007
易于获取胚胎实验允许使用几种方法，包括鸡鹌鹑嵌合体和联络染色标记的细胞命运映射。在这篇文章中，我们展示了一个鸡蛋的制备方法，已为长期生存时间进行了优化。
欢迎来到 Kramer 实验室。我是加州大学欧文分校神经生物学和行为系的 Matt Korn。今天，我将向您展示如何为各种作准备鸡蛋，包括珠子放置、染料注射或卵探索。
因此，事不宜迟，让我们开始吧。好了，我们继续清理鸡蛋。原因是孵化器里有很多东西可以放上去。
我们将用胶带密封。我们不希望任何小碎片绕过窗口将要获得卵子的地方，并增加胚胎在我们想要取出时死亡的机会。所以，如果你从孵化器中看到，鸡蛋的大面朝上。
所以我们要做的是，我们要继续拿起鸡蛋，然后把它转向一边。这将做两件事。第一，我们的窗口就在这里，第二，胚胎需要漂浮到顶部，这样我们就可以进行任何类型的作。
所以我要在这里列出一些，从孵化器中的架子到纸板蛋架。这实际上是鸡蛋交付时装在盒子里的那块。所以今天，我们将继续使用它来容纳鸡蛋。
现在安排是，由您决定。我喜欢这样做，因为我可以随时访问所有鸡蛋，而且它们都没有相互接触。如果我找到一个松散的、有裂缝的并要掉落它，它们彼此之间都有一点点空间。
所以我要继续把我的纱布拿到这里，拿出一叠像这样的漂亮东西，然后一分为二。我要在这里喝 70% 的酒精，然后我要把它装满，直到我能感觉到底部变湿。这就是因为我要使用这整堆鸡蛋来擦拭所有鸡蛋。
所以，我就从顶部去掉几个，继续做顶部，但实际上几乎绕过了整个鸡蛋。完成后，酒精很快就会干，然后我们可以继续在上面贴上胶带。胶带会很好地粘住，当我完成一套时，通常第一组已经干燥，我们可以进行下一步的鸡蛋准备。
所以再一次，把它放回垃圾桶里，我们就可以进行下一步了。好了，现在我们所有的鸡蛋都已经用酒精擦拭了，我们可以继续在鸡蛋的大边，即鸡蛋的底部做一个排水孔。这将允许我们进入并提取一些白蛋白，因为如果我们不提取白蛋白，那么胚胎就不能正常放置。
我们不能进行任何作。所以这只需要我拿一把刀片，拿走这条塑料胶带。它有一点弹性，这很棒。
如果洞比我们想要的要大一点，它不仅可以让我们在一个洞上膨胀，而且当我们真正覆盖整个鸡蛋时，我们将需要拉伸它。所以窗户所在的区域被完全覆盖。所以我就这样把这块剪下来，然后制作大约一毫米的条带。
然后我可以用它制作大约一毫米见方的胶带。然后，我将继续将其放在日期左侧的正上方。只要把它放在那里，你就可以看到它。
它粘得非常好。然后我可以回到我已经制作的条带上，再剪下一条毫米的胶带。再说一次，只需将其放在数字的左侧，这实际上是鸡蛋的顶部。
现在我们已经把它转向了侧面，它向右转了。这里还有一件。现在我不戴手套了，因为戴手套会让胶带粘在手套上，我已经洗手了。
在这一点上，我并不真正关心任何其他污染 active 的东西。所以我要继续拿一把尖锐的剪刀。我要走到我放置胶带的中心，然后以逆时针顺时针方向转动它，直到我把它填满一点点。
你会看到那里有一个小洞。现在这个孔不需要很大，因为一旦我们把这个注射器放进去，它就会使这个孔足够大。但这是为了让我们不要直接用针头进去，然后试图用针头打碎鸡蛋，因为这通常会导致鸡蛋的整个侧面破裂。
那我们就不能再使用鸡蛋了。好了，现在我要继续把鸡蛋排空。我们在侧面有一个漂亮的小孔，我将使用这个 10 毫升注射器和一个相当大规格的针头来提取白蛋白。
现在我想要大约 3 或 4 毫升，绝对超过 3 毫升，不超过 4.5 或 5 毫升。这将使我们现在位于顶部的胚胎从壳上落下一点。然后我们就可以进行我们的作了。
所以以 45 度角进入，我就在蛋黄下面。然后我只想把它向右转一点，偷偷溜到那里，你可以感觉到针尖刚好碰到鸡蛋的底部。我将继续提取大约三四个，结果非常好。
我打算把那颗白蛋白放进我的腰桶里，现在我可以继续处理其他鸡蛋了。好了，我将继续。您将在此处看到，我为排水开的孔比我想要的要大一点，但事实证明这没问题。
我想关心的是，当我把针扎进去时，我不会再破解它了。所以我要继续这样做。好的，我已经可以看到鸡蛋上面有一点裂缝。
现在小裂缝没问题，但当它延伸到鸡蛋的另一个平面时，您需要担心。在这种情况下，它确实如此。你可以从洞中看到这一点。
它几乎延伸到顶部。事实上，这就是我们的窗户所在的位置。所以不幸的是，对于这个鸡蛋，我们将不得不丢弃这个鸡蛋。
丢弃它并没有什么特别之处。你不需要编写特定的协议或任何东西。只是打算把它扔进垃圾桶里。
我们用这些黑色垃圾桶来将它们指定为动物粪便，但除此之外，它已经被处理好了。我们可以继续下一个鸡蛋。好了，现在我们已经排干了所有的鸡蛋，我们可以继续盖上排水孔。
现在这很重要，因为如果我们不在培养箱内部，我们就会大量蒸发白蛋白的剩余部分。然后一个干燥的鸡蛋就是死的鸡蛋。所以我们要继续，取大约相同大小的胶带，把它放在孔上，我们就不必担心再次进入这个孔。
在某些情况下，如果您决定尝试从卵子中排出更多的白蛋白，一旦卵子打开，这个孔就会充当一个密封区域，然后您可以将其插入，这样您就不会损失大量白蛋白。好吧，是吗？好了，现在我们要用一条大小合适的胶带盖住鸡蛋。
我把这比作在气球上放一条胶带，然后再把一个小针扎进去。很酷的是气球不会爆裂，在这种情况下，鸡蛋上会贴上一点胶带。鸡蛋不会在多个地方破裂，然后可以密封窗户，然后当窗户关闭时，因为我们使用了胶带，它形成了一个很好的小密封，我们不需要担心任何蒸发。
所以你可以看到胶带的尺寸，这可能是我迄今为止剪掉的最大的，但即便如此，我还是要继续把它拉伸一点，真的只是拉它，那里有一点张力，然后把它放在鸡蛋上。我要绕过后面，非常小心地把它拉到鸡蛋上，这样我的窗户就会出现折痕。你可以稍微重置磁带。
就是，它不会粘得那么厉害，你得担心。一旦卡住了，它就卡住了。你可以看到，这里的这个一般区域是我要继续切开窗口的地方。
好了，现在我们已经在所有鸡蛋上贴上了胶带，我们可以继续在顶部切一个窗口。这可能是最困难的部分，通常这是您失去大部分鸡蛋的地方。所以我打算继续用沾有酒精的纱布把我的剪刀擦干净，然后继续擦干它。
酒精几乎会自行变干，但您不希望酒精直接进入鸡蛋。所以我要走到磁带所在的中间，再次使用逆时针方向的逆时针运动，直到我听到它有一点裂缝。然后我知道我的刀片已经进去了。
然后我有点想把我的剪刀移出去，让它们几乎平贴鸡蛋的表面。然后做一些小剪子，直到我可以把整把剪刀都剪进去。一旦我完成了大约半个圆圈，我不想完成这个圆圈，因为我想要一个窗口，但随后我可以继续打开鸡蛋。
现在看起来他们的年龄和我预期的差不多，没有很多血管，但胚胎所在的周围有一点血液，主要来自妞妞区，血液现在已经开始了，心跳已经消失了。所以我就把它关上，让它像那样坐在上面，然后再次出现，然后我继续关上窗户。再说一次，只是平放在表面，然后向另一个方向返回。
好的，我们这里有几个气泡，结果证明胚胎偏向一边。现在我们现在可以做两件事。如果我们有很多鸡蛋并且我们不担心用完每一个鸡蛋，我们可以继续扔掉它。
或者我们能做的是，我们可以关上窗口，然后设置它，这样胚胎就会再次漂浮到我们想要的顶部。当我们在作中接触到它时，它可能就是我们想要的地方。如果没有，我们可以在那时丢弃它。
所以我在这里所做的只是将其设置成一个角度。你会有一点白蛋白流失，但它会帮助胚胎回到它需要的地方。好了，现在我们已经有了所有这些窗口，我们需要确保它们都是关闭的，我们只希望它们在进行任何作之前关闭它们。
然后我们可以继续重新密封鸡蛋。但是，如果我们有一个敞开的窗户，有时轭会滑落。如果你知道鸡蛋在从一个房间走到另一个房间时会稍微倾斜一点，你不希望整个东西掉出来。
所以我所做的只是再剪一毫米长，或者对不起，毫米宽，大概是三毫米、两毫米或三毫米长的塑料胶带。我有点喜欢把它放在中间。如果我能把它拉到鸡蛋前面，那么它就会变得很紧。
你可以看到窗户适合的地方，就在另一条胶带所在的位置，我们把窗户切开的地方，这一次它变得非常密封。我的意思是，我们将在一分钟内进行一些作，因此不需要完全密闭。这就是你准备和开窗鸡蛋的方式。
祝你的实验好运。
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概述
本文介绍了一种为神经生物学实验中的各种操作准备鸡蛋的方法。该技术针对长期存活时间进行了优化，有助于研究细胞命运映射。
关键研究组成部分
科学领域
- 神经生物学
- 胚胎发育
- 实验技术
背景
- 鸡胚适合进行实验操作。
- 细胞命运映射对于理解发育生物学至关重要。
- 存在多种操作胚胎的方法，包括染料标记。
- 优化蛋的准备可以提高实验结果。
研究目的
- 展示一种用于神经生物学实验的蛋的准备方法。
- 提高操作过程中胚胎的存活时间。
- 为珠子放置和染料注射等技术提供便利。
使用的方法
- 清洁蛋以防止污染。
- 为珠子放置准备蛋。
- 注射染料以便于可视化。
- 进行胚内探索以进行发育研究。
主要结果
- 该蛋的准备方法提高了胚胎的活力。
- 为实验目的提供了各种操作的便利。
- 展示了在细胞命运映射方面的有效性。
- 为研究人员提供了一个可靠的协议。
结论
- 优化的蛋的准备方法对神经生物学研究有益。
- 较长的存活时间允许进行更广泛的实验。
- 该技术可以应用于各种实验设计。
常见问题
Executive Industry Relevance
This method enables reliable access to chicken embryos for developmental studies, supporting target validation in neurobiology research. By optimizing survival times through a simple windowing technique, it reduces experimental variability and improves data consistency for mechanistic studies. The approach facilitates early-stage hypothesis testing in a disease-relevant system, enhancing predictive confidence in target engagement and pathway modulation.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Supports interrogation of therapeutic hypotheses through direct embryo manipulation and observation.
- Operational Value: Enables functional target validation via bead placement, dye labeling, or genetic perturbation in a controlled environment.
- Predictive Value: Improves confidence in target mechanisms by allowing longitudinal observation of developmental phenotypes.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Prepares validated biological systems for compound screening by ensuring embryo viability and accessibility.
- Operational Value: Standardizes embryo preparation, reducing variability across replicates and improving assay reproducibility.
- Scalability: Uses low-cost, widely available materials enabling high-throughput adaptation for screening campaigns.
Translational & Preclinical Research
- Translational Continuity: Provides a disease-relevant system for studying neurodevelopmental pathways conserved in vertebrates.
- Mechanistic De-risking: Allows testing of molecular perturbations (e.g., protein-coated beads, plasmid DNA) to assess target engagement and pathway effects.
- Preclinical Alignment: Supports progression from discovery to preclinical validation by enabling consistent phenotypic readouts.
Pipeline & Workflow Integration
The method fits within the early discovery continuum, supporting hypothesis generation and mechanistic exploration before lead identification. It enables reproducible preparation of embryos for downstream applications in screening and validation workflows.
- Discovery Biology: Facilitates hypothesis testing and pathway clarification through direct embryonic manipulation and live imaging.
- Screening: Delivers assay-ready embryos with standardized viability, enabling reliable compound or perturbation evaluation.
- Analytics: Enables quantitative dependent variable measurements (e.g., dye dispersion, bead localization, electroporation efficiency) for objective comparison across conditions.
- Translational Research: Connects early discovery to preclinical work by maintaining developmental continuity and supporting biomarker-aligned readouts.
- Enterprise Reuse: Establishes a reusable platform for developmental neurobiology, reducing re-optimization costs across projects.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence by reducing mechanistic ambiguity in developmental pathways.
- Operational Value: Enhances standardization and reproducibility across labs and experiments through a simple, robust protocol.
- Strategic Value: Supports better go/no-go decisions by improving data quality and reducing false negatives from embryo loss.
- Portfolio Impact: Enables risk-adjusted prioritization of targets based on consistent developmental phenotypes.
Implementation Considerations
- Requires basic embryology training and aseptic technique to prevent contamination.
- Needs standard lab tools: scissors, syringe, needle, gauze, alcohol, and adhesive tape.
- Demands consistent handling to maintain embryo orientation and viability across replicates.
- Requires adaptation for different developmental stages, as window size and positioning may vary.
- Limited by the natural incubation timeline of chicken embryos, restricting long-term culture beyond embryonic stages.
