用于发育研究的鸡胚开窗法

欢迎来到Kramer实验室。我是加州大学欧文分校神经生物学与行为学系的Matt Korn。今天我将向您展示如何准备鸡胚蛋以进行多种操作，包括放置琼脂糖珠、注射染料或进行鸡胚内探查。

那么，事不宜迟，让我们开始吧。首先，我们要着手清理鸡蛋，原因是孵化箱中可能存在多种污染物。

我们将用胶带将其密封。我们不希望有任何细小的碎屑进入窗口区域，以免在取出胚胎时增加胚胎死亡的风险。因此，如您从培养箱中所见，卵应将较大的一端朝上放置。

我们将把鸡蛋侧放。这样做有两个目的：第一，我们的操作窗口就位于此处；第二，胚胎需要上浮到顶部，以便我们进行各种操作。

我将从培养箱中的架子上取出几枚鸡蛋，放入一个纸板制的蛋托中。这个蛋托实际上是鸡蛋递送时包装箱内附带的部分。因此，今天我们直接用它来盛放鸡蛋。

现在如何摆放就由你决定了。我喜欢这样放置，因为这样我可以随时接触到所有的卵，并且它们彼此之间互不接触。万一我发现其中有一颗卵有裂缝而脱落，它们之间也都有一定的空间，不会相互影响。

现在，我将取用这里的纱布，取出这样整齐的一叠，然后将其分成两半。接着，我会取70%酒精，慢慢倒入，直到感觉底部开始变潮湿为止。这是因为我要用整叠纱布来擦拭所有的卵。

然后我只需取走顶部的少量酒精，继续操作，实际上几乎要覆盖整个卵的表面。酒精干燥得很快，之后我们就可以继续在卵上贴胶带。胶带会很好地粘附，等到我完成一组操作时，通常第一个卵已经干燥，我们便可以继续进行卵制备的下一步骤。

再次，将棉签放回垃圾桶中，接下来我们就可以进行下一步了。好的，现在所有鸡蛋都已用酒精擦拭完毕，我们可以继续在鸡蛋较大的一端，也就是鸡蛋的底部，打一个排水孔。这样我们就能进入蛋内并抽出部分蛋清，因为如果不抽出蛋清，胚胎就无法正常固定位置。

我们无法进行任何操作。因此，这只需要我取一把刀片和这条塑料胶带即可。这种胶带有一点弹性，非常合适。

它不仅能在孔洞比我们预期稍大时进行扩展，而且在实际覆盖整个卵时，我们还需要对其进行拉伸。因此，窗口所在区域必须完全覆盖。现在我将直接这样切下这块膜，然后制作一条大约一毫米宽的细条。

然后，我可以从这上面裁下一小块约一平方毫米的胶带。接着，我将直接把它贴在日期左上方的位置，就放在那里，你可以看到。

它粘得非常好。然后我可以回到之前制作的条带上，再剪下一段一毫米长的胶带。接着，将其放置在数字左侧的位置，也就是卵的顶部。

现在我们已经将它侧放，它位于右侧。这里再放一个部件。目前我没有戴手套，因为戴手套会使胶带粘在手套上，而且我已经洗过手了。

目前我并不太担心其他任何物质会污染活性成分。因此，我将直接使用一把尖头剪刀，从我贴胶带位置的中心插入，然后顺时针旋转，直到将其稍微切开一点。

你会看到那里有一个小孔。这个孔不需要很大，因为一旦我们将注射器插入，孔就会被撑大到足够尺寸。这样做是为了避免直接用针头刺入，以免试图击破蛋壳时经常导致蛋壳一侧完全破裂。

然后我们就不能再使用这个蛋了。好的，现在我将开始排出蛋液。我们在蛋壳侧面已经打了一个不错的小孔，接下来我会使用这个10毫升的注射器和一根较粗的针头，将蛋清抽出来。

现在我需要大约三到四毫升，一定要超过三毫升，但不要远超过四点五或五毫升。这样可使目前位于顶部的胚胎稍微远离外壳，便于我们进行后续操作。

因此，以45度角插入，我就能到达蛋黄下方。然后我只需将针头稍微向右转动，以便悄悄滑入下方，此时可以感觉到针尖轻轻触碰到蛋壳底部。接下来，我将抽取大约三到四微升，液体能很顺利地被抽出。

现在我要把白蛋白放入我的腰桶中，然后就可以继续处理其他鸡蛋了。好的，接下来我将继续操作。你们会看到，我为引流所打的孔比预想的稍大一些，但结果证明这并没有问题。

我需要关注的是，在插入针头时不要再把蛋壳弄裂了。因此，我将小心地进行这一步操作。好的，目前我已经看到蛋壳上出现了一道细小的裂纹。

现在的小裂纹是可以接受的，但当裂纹延伸到蛋的另一个平面时，您就需要关注了。而在此情况下，裂纹确实已经延伸。您可以通过这个孔洞看出来。

它几乎延伸到了顶部。事实上，我们的窗口将位于此处。因此，对于这个卵来说很遗憾，我们将不得不将其移除并丢弃。

丢弃它并没有什么特别的注意事项。你不需要撰写特定的处理流程或任何其他说明。只需将其放入废物桶即可。

我们使用这些黑色垃圾桶来专门存放动物废弃物，除此之外，其他事项都已处理完毕。接下来我们可以进行下一个鸡蛋的操作。好的，现在我们已经将所有鸡蛋的液体倒出，可以继续进行下一步，即封堵排水孔。

这一点非常重要，因为如果不这样做，在培养箱内残留的白蛋白会大量蒸发。而干燥的卵意味着死亡的卵。因此，我们将继续使用大约相同大小的胶带覆盖住这个孔，这样就无需再次打开这个孔了。

在某些情况下，如果你决定在打开鸡蛋后尝试从中提取更多的蛋清，此时这个小孔可起到一定的密封作用，你可以将针头插入其中，而不会损失太多蛋清。好的，是这样吗？好的，现在我们将继续用一块大小合适的胶带将鸡蛋覆盖住。

我将这个过程类比为在气球上贴一小块胶带，然后再用针轻轻刺入。有趣的是，气球不会爆裂；同样地，在鸡蛋上贴一小块胶带，鸡蛋也不会在多个位置开裂。随后可以将窗口密封，当窗口关闭时，由于使用了胶带，能够形成一个良好的密封效果，我们也就无需担心任何蒸发问题。

因此你可以看到胶带的尺寸，这可能是我目前裁剪过的最大的一块，但即便如此，我还是会再稍微拉伸一下，轻轻拉拽，施加一点张力，然后将其覆盖在鸡蛋上。接下来，我会从后侧绕过去，非常小心地将胶带拉伸覆盖整个鸡蛋，确保我即将开窗的位置没有褶皱。你可以稍微调整一下胶带的位置。

它不会粘得很厉害，所以不必担心。一旦粘住了，就固定了。你可以看到，我将要着手切割窗口的区域就是这里。

现在所有鸡蛋上都贴好胶带了，我们可以继续在顶部切一个窗口。这一步可能是最困难的部分，通常也是大多数鸡蛋容易损失的环节。因此，我先用沾有酒精的纱布仔细擦拭一下剪刀，然后再将其擦干。

酒精基本上会自行挥发干净，但你不希望酒精直接进入卵内。因此，我会将刀片插入胶带覆盖区域的正中央，并再次使用顺时针和逆时针交替的运动，直到我听到轻微的开裂声。这时我就知道刀片已经进去了。

然后我想将剪刀稍微向外移动，使其几乎平贴在蛋壳表面。接着只需进行微小的剪切，直到能将整个剪刀尖端插入其中。当我剪出大约半个圆时，再从另一侧返回操作，但不要完全剪成一个闭合的圆，因为我想留下一个窗口，这样就可以直接将蛋壳打开。

目前看来，它们的发育阶段基本符合我的预期，血管分布还不多，但在胚胎所在位置周围已出现少量血液，主要来自卵黄区域，血液已经开始循环，但心跳已经停止。因此，我将关闭培养装置，让样本保持这样的状态静置，然后再次绕回，继续关闭窗口。同样，将其轻轻压平贴合表面，再反向操作一次。

好的，这里有几个气泡，结果发现胚胎偏向一侧。现在我们有两种处理方式。如果我们有足够的卵子，并且不介意使用每一个卵子，那么我们可以直接丢弃这个。

或者，我们可以关闭窗口，仅进行设置，使胚胎重新漂浮到顶部我们所需的位置。等到我们进行操作时，胚胎可能已经到达理想位置。如果仍未到位，我们可以在当时将其弃用。

我在这里所做的就是将其倾斜一定角度。这样会有一点白蛋白流出，但有助于胚胎回到其应处的位置。好了，现在我们已经打开了所有这些窗口，需要确保它们都已关闭，在进行任何操作之前，必须先将其封闭。

然后我们可以继续将蛋重新封好。但如果有一个开口，蛋黄有时会滑出。当你从一个房间走到另一个房间时，如果蛋稍微倾斜一下，你肯定不希望里面的东西全部掉出来。

因此，我只是在塑料胶带上裁下一小段，宽约1毫米，长度大约2到3毫米。我喜欢将它贴在正中间。如果我能把它拉到卵的前方，就能使其绷紧。

你可以看到窗口的位置，正好是之前贴胶带的地方，也就是我们切割窗口的位置，这样暂时已经相当密封了。我的意思是，我们马上就要进行一些操作，所以暂时不需要完全气密。这就是制备和开窗处理鸡蛋的方法。

祝您的实验顺利。