制备抗原-佐剂乳剂以诱导自身免疫性脑脊髓炎

实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）是一种中枢神经系统疾病。自身抗体靶向神经元髓鞘上的髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（MOG），导致髓鞘破坏和神经退行性变。

在小鼠中诱导EAE需要注射含有自身抗原MOG与佐剂（包含细菌抗原）混合的抗原-佐剂乳剂，以增强免疫反应。

为制备乳剂，取含有MOG的水相悬浮液置于匀浆管中。将试管置于冰上，以防止抗原降解。

加入佐剂——即分散在油相中的灭活病原菌。将试管放入振荡式匀浆器中。振荡引起液体湍流，从而形成乳剂。

在显微镜下，该乳剂显示出均匀分散的微米级水相液滴——内含MOG——分布于连续的油相中。乳剂的均一性可确保疾病诱导的可重复性更高。

将乳剂注入易感小鼠品系时，将注射器连接在管子前端，将乳剂转移至注射器中。取一只已麻醉的小鼠，皮下注射该乳剂。

注射后，乳剂中的油可确保抗原缓慢且持续地释放，从而延长免疫反应的持续时间。

乳剂中的灭活病原体会引发局部炎症反应，募集免疫细胞至注射部位。募集的免疫细胞识别释放的MOG抗原并刺激抗体产生，从而诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的发生。

将带螺帽的试管置于冰上，用于盛放待用试剂。接着，依次加入乳液组分：首先加入 PBS，然后加入多肽、CFA 混悬液，最后加入 IFA。将管盖拧紧后，反复拧紧和松开数次，以确保密封。用手剧烈振荡试管 5 至 10 秒，使试剂初步混匀。

将离心管放入振荡式匀浆器中，并用金属杆固定。将转速调至最高档，时间设定为60秒。运行结束后，将离心管置于冰上静置3分钟，然后以相同参数重复运行1至2次。以300 × g离心1分钟，以去除 trapped 气泡并压实乳浊液。取下管盖，将推杆插入管内，缓慢下压直至到达乳浊液顶部。通过旋转拧下离心管底部的可折除外壳。

接下来，从所有注射器中取出推杆，并在注射器上安装针头。然后，将注射器的尾端连接到管子底部的专用卡口，并轻轻旋转一下将其锁定。通过轻推推杆，将乳剂从管子转移到注射器中。

当乳剂达到注射器0.15毫升刻度时停止。将注射器与管子分离，小心插入活塞，注意避免空气进入注射器。推动活塞直至乳剂从针头中流出，然后对管中剩余的乳剂重复此操作。

为了分析油包水颗粒的大小，将少量乳液滴加到显微镜载玻片上，用盖玻片将其摊开，然后用力以圆形轨迹按压，使乳液压平。

在400倍放大倍数下，使用相差显微镜观察涂布的乳液，聚焦于乳液单层区域，确保可见细小、均匀的灰色或白色颗粒。