体外分离源自凋亡T淋巴细胞的微颗粒

细胞微颗粒是亚微米级的膜结合囊泡，由经历凋亡的真核细胞质膜释放，包裹着生物分子。

为制备T淋巴细胞来源的微颗粒（LMPs） 体外取一个含有T淋巴细胞培养物的培养瓶，加入抗生素放线菌素-D，孵育适当时间。

放线菌素D进入淋巴细胞并转位至细胞核。它插入特定的DNA碱基对之间，抑制转录过程。这会导致细胞周期阻滞并激活凋亡通路。

细胞凋亡初期，活化的caspase-3切割并激活Rho相关激酶ROCK1。ROCK1继而磷酸化其下游靶蛋白，引起肌动球蛋白收缩，导致细胞膜起泡，并最终将含有胞质和核成分的LMPs释放到培养基中。

细胞最终会经历凋亡。

孵育结束后，将培养基转移至新的离心管中。离心以沉淀T淋巴细胞。将上清液转移至新的离心管中。

离心以去除大块细胞碎片。将含有LMPs的上清液转移至瓶中。进行高速超速离心，使LMPs沉淀成团。用缓冲液重悬LMPs。保存于低温条件下，直至进一步分析。

首先，将CEM T细胞在四个T175培养瓶中培养，每个培养瓶中加入150毫升新鲜培养基，在37摄氏度下孵育至细胞密度达到每毫升200万个细胞。

通过在200 × g 条件下离心5分钟，收集每个烧瓶中的细胞，并将300 × 10⁶个细胞重悬于含有150毫升新鲜培养基的新T175烧瓶中，以维持每毫升200万个细胞的密度。向培养基中加入37.5 µL放线菌素D，使其终浓度达到0.5 µg/mL，并在37°C下孵育24小时。

将所有培养基转移至50毫升锥形管中，在750 × g 条件下离心5分钟以沉淀细胞。随后，将上清液转移至50毫升锥形管中，在1,500 × g 条件下离心15分钟，以去除较大的细胞碎片。

接下来，将上清液转移至一个 250 毫升的瓶子中，在 12,000 × g 条件下超速离心 50 分钟。然后弃去上清液，收集沉淀。使用 40 毫升无菌 PBS 在 50 毫升离心管中洗涤富含 LMP 的沉淀物，并在 12,000 × g 条件下离心 50 分钟。重复此步骤两次。

取最后一次洗涤的上清液，作为载体对照，加入1毫升PBS。重悬沉淀物，并转移至1.5毫升无菌微量离心管中。分装后于-80摄氏度保存分离得到的LMPs。