利用螺旋微流控通道从气管分泌物中无标记分离中性粒细胞

中性粒细胞——具有多叶核的免疫细胞，通过吞噬入侵的病原体来调节气管免疫。

为了从气管分泌物中分离中性粒细胞，请使用螺旋微流控通道开始操作。

螺旋通道从中心入口开始，逐渐延伸并分叉为内壁出口和外壁出口。分叉通道具有不同的厚度，可确保高效的分离效果。每个弯曲通道呈梯形，其外壁高度大于内壁高度，从而形成可变的流动模式。

用预先过滤并稀释的人类气管分泌物填充入口，该分泌物包含黏蛋白聚集体、中性粒细胞和红细胞——作为偶然污染物。以特定流速使样品流经螺旋微通道，从而实现细胞和聚集体的分散。

当细胞流经梯形通道时，会受到迪恩拖拽力和惯性升力的作用。这两种力的相互作用形成平衡，从而根据细胞的大小实现分离。因此，较大尺寸的中性粒细胞聚集在通道内壁附近，而红细胞和黏蛋白聚集体则停留在通道外壁附近。

最后，中性粒细胞通过较宽的通道，并在内壁出口处被收集。

相比之下，狭窄通道将红细胞和黏液聚集体收集于外壁出口，从而确保中性粒细胞的有效分离。

使用10毫升注射器在9毫升磷酸盐缓冲液中收集1毫升呼吸道分泌物样本。然后借助钝头移液器将黏液样本充分混匀。接着，使用40微米尼龙细胞滤网过滤稀释液，去除组织碎片或血凝块。过滤完成后，将样本置于冰上。

然后，向0.5毫升的样本稀释液中加入50毫升磷酸盐缓冲液，以获得最终稀释1,000倍的样本。使用流体导引装置组装PDMS芯片，以便向四个螺旋微通道施加均匀的流体流动。接着，使用直径为1/16英寸的公鲁尔接头连接流体导引装置的入口、内壁出口和外壁出口端口。

然后，将硅胶管连接至样品悬液。接着，将蠕动泵连接至进样管。将外壁出口管置于废液储液槽中。然后将进样管末端和内壁出口管置于样品储液槽中。

放置好管路后，在样品储液槽中留一个含有5毫升不含钙和镁的磷酸盐缓冲液的50毫升离心管。然后，为启动装置，以大约1毫升/分钟的流速开始泵液。

将样品放入样品储液池后，打开蠕动泵并将流速设定为4毫升每分钟。当样品体积达到约1至2毫升的所需体积时，停止操作并断开管路。