0 次观看 • 3:28 分钟 • July 8th, 2025
为了对携带特异性识别鸡卵清蛋白肽的T细胞受体(TCR)的小鼠辅助性T细胞(Th淋巴细胞)进行放射性标记,取一个含有具有所需放射活性的放射性标记单克隆抗体(mAb)的试管。
该单克隆抗体包含一种针对小鼠Th淋巴细胞膜上表达的TCR的鼠源单克隆抗体。一种螯合剂将该单克隆抗体与一种发射正电子的铜同位素连接,形成稳定的复合物。
用生理盐水稀释放射性标记的单克隆抗体。接着,将稀释后的放射性标记单克隆抗体加入含有Th淋巴细胞悬液的多孔板中。短暂孵育。
在培养过程中,放射性标记的单克隆抗体结合到辅助T淋巴细胞膜上的T细胞受体(TCRs)。孵育结束后,将细胞悬液转移至新的离心管中。
离心。弃去含有未结合放射性标记抗体的上清液。将Th淋巴细胞重悬于培养基中,并转移至多孔板。长时间孵育。
放射性标记的单克隆抗体-TCR 结合导致衔接蛋白被招募至质膜的胞质侧,网格蛋白三脚架结构结合于此并形成网格蛋白包被小窝。
辅助蛋白有助于将囊泡从质膜上掐断,促进放射性标记的mAb-TCR复合物内化进入细胞质。最终,TCR会重新表达在辅助性T淋巴细胞的膜上。
放射性标记的Th淋巴细胞已准备好用于进一步实验。
对于鸡卵清蛋白特异性TH1细胞的放射性标记,首先使用活度计将37兆贝可勒尔(MBq)目标T细胞特异性放射性抗体吸入无死腔的注射器中。
接下来,将抗体加入反应杯中,测量并从抽取的量中减去注射器中剩余的反应活性量。然后,向反应杯中加入一毫升生理盐水,制备成每毫升37兆贝可勒尔的溶液。
接着,将两倍十的六次方个OVA-TH1细胞加入0.5 ml完全培养基中,分别加入48孔板的每个孔内,随后加入20 µL放射性标记的抗体溶液。在符合辐射安全要求的37°C、7.5%二氧化碳细胞培养箱中孵育30分钟后,将标记的细胞收集至50 mL锥形管中,用10 mL 37°C的PBS洗涤两次。
本文介绍了一种对表达特异性识别鸡卵清蛋白肽T细胞受体的鼠源辅助性T淋巴细胞进行放射性标记的方法。该过程采用放射性标记的单克隆抗体,促进T细胞受体复合物内化进入淋巴细胞的细胞质。
使用单克隆抗体对小鼠辅助性T淋巴细胞进行放射性标记,可利用PET/CT成像技术实现对免疫细胞迁移的精确、无创追踪。该技术有助于免疫学相关药物研发中的早期靶点验证和机制性风险排除。该方法提高了免疫调节策略的预测可信度,并为肿瘤免疫学和自身免疫研究中的项目决策提供依据。
这种放射性标记方法可融入从发现到临床前研究的连续流程,支持早期的机制研究和转化成像工作流程。
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最后更新:29 八月 2026