使用放射性标记单克隆抗体标记小鼠辅助性T淋巴细胞

0 次观看3:28 分钟 • July 8th, 2025

为了对携带特异性识别鸡卵清蛋白肽的T细胞受体(TCR)的小鼠辅助性T细胞(Th淋巴细胞)进行放射性标记,取一个含有具有所需放射活性的放射性标记单克隆抗体(mAb)的试管。

该单克隆抗体包含一种针对小鼠Th淋巴细胞膜上表达的TCR的鼠源单克隆抗体。一种螯合剂将该单克隆抗体与一种发射正电子的铜同位素连接,形成稳定的复合物。 

用生理盐水稀释放射性标记的单克隆抗体。接着,将稀释后的放射性标记单克隆抗体加入含有Th淋巴细胞悬液的多孔板中。短暂孵育。

在培养过程中,放射性标记的单克隆抗体结合到辅助T淋巴细胞膜上的T细胞受体(TCRs)。孵育结束后,将细胞悬液转移至新的离心管中。

离心。弃去含有未结合放射性标记抗体的上清液。将Th淋巴细胞重悬于培养基中,并转移至多孔板。长时间孵育。

放射性标记的单克隆抗体-TCR 结合导致衔接蛋白被招募至质膜的胞质侧,网格蛋白三脚架结构结合于此并形成网格蛋白包被小窝。

辅助蛋白有助于将囊泡从质膜上掐断,促进放射性标记的mAb-TCR复合物内化进入细胞质。最终,TCR会重新表达在辅助性T淋巴细胞的膜上。

放射性标记的Th淋巴细胞已准备好用于进一步实验。

对于鸡卵清蛋白特异性TH1细胞的放射性标记,首先使用活度计将37兆贝可勒尔(MBq)目标T细胞特异性放射性抗体吸入无死腔的注射器中。

接下来,将抗体加入反应杯中,测量并从抽取的量中减去注射器中剩余的反应活性量。然后,向反应杯中加入一毫升生理盐水,制备成每毫升37兆贝可勒尔的溶液。

接着,将两倍十的六次方个OVA-TH1细胞加入0.5 ml完全培养基中,分别加入48孔板的每个孔内,随后加入20 µL放射性标记的抗体溶液。在符合辐射安全要求的37°C、7.5%二氧化碳细胞培养箱中孵育30分钟后,将标记的细胞收集至50 mL锥形管中,用10 mL 37°C的PBS洗涤两次。

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最后更新:29 八月 2026