0 次观看 • 4:29 分钟 • July 8th, 2025
为了监测中性粒细胞（一种有助于清除细菌的必需免疫细胞）的募集情况，首先准备一只已麻醉的、转基因的、免疫缺陷小鼠，其背部伤口暴露了结缔组织。
该转基因小鼠的中性粒细胞表达增强型绿色荧光蛋白，有助于中性粒细胞的示踪。此外，由于其杀菌能力受损，该小鼠更易受到感染。
取一种具有生物发光特性（即能够发光）的基因改造细菌接种剂。
在损伤部位注射细菌接种物，确保将其注入结缔组织与筋膜之间的区域——筋膜是位于结缔组织下方的纤维组织层。在注射部位，细菌增殖并定植，引发组织感染。
为应对感染，免疫细胞会释放趋化因子——一类能够吸引中性粒细胞的化学信号分子。中性粒细胞迅速迁移 通过 趋化性——由化学物质诱导的运动，并通过血管壁渗出至细菌感染附近的组织中。
对小鼠进行生物发光和荧光信号成像，分别代表细菌负荷和募集的中性粒细胞。
随着时间推移，生物发光和荧光信号的增强与感染部位细菌负荷的增加以及中性粒细胞的持续募集相关。
对于金黄色葡萄球菌（Staph aureus）接种，用50微升制备好的生物发光细菌接种液填充28号胰岛素注射器，并用手指将受伤动物的真皮层向一侧牵拉。将注射器几乎与组织平行持握，缓慢插入组织，直至感觉到阻力突然降低，表明已穿透筋膜。
将针头置于伤口中心，缓慢注入全部接种物。确认接种物在伤口中心形成气泡，且无明显泄漏或扩散后，缓慢将注射器从动物体内抽出。随后将动物放回笼中，给予保温和监测，直至完全恢复。
在造模损伤和感染后，以及实验期间每天，将麻醉的小鼠置于生物发光与荧光成像仪中，使伤口尽可能平展。在成像软件中，选择生物发光和拍照作为成像模式。曝光时间应预设为1分钟，采用小 binning 模式，生物发光的光圈设为 F/1，拍照的光圈设为 F/8，发射滤光片选择开放。然后点击采集以记录图像。
对于 在 体内 荧光成像，选择 荧光 和 拍摄照片 作为成像模式。曝光时间应在小像素合并模式、光圈F/1时预设为1秒 荧光 F/8 拍摄照片， 激发波长为465±30纳米，发射波长为520±20纳米，分别设置为高灯强度。然后，单击 获取 以记录图像。
获得两组图像后，将动物放回笼中并监测直至完全恢复。
进行图像分析时，在合适的图像分析软件中打开待量化的图像，将默认的圆形感兴趣区域覆盖整个伤口区域，包括周围皮肤。单击 测量 区域 的 兴趣 记录伤口平均通量的数值，以便绘制每个信号的平均通量曲线 与 时间
为测量伤口愈合情况，将一个圆形感兴趣区域覆盖在伤口边缘，并测量伤口面积（单位：平方厘米），以便绘制相对于基线的面积变化分数 与 时间