小鼠模型中抗体诱导腹腔巨噬细胞的体内活化

腹腔巨噬细胞位于腹腔内，可吞噬病原体并分泌促炎性和抗炎性细胞因子，以调节免疫反应。

研究 体内 通过激活腹膜巨噬细胞，首先固定小鼠以减少其活动。取脂多糖（病原体来源的抗原）与静脉注射用免疫球蛋白的混合物，进行腹腔注射。

注射后，脂多糖会结合巨噬细胞的模式识别受体，触发免疫反应并释放包括IL-12在内的促炎性细胞因子。

相比之下，免疫球蛋白与巨噬细胞的 Fc 受体相互作用，通过抑制 IL-12 的产生并促进抗炎细胞因子（包括 IL-10）的释放，从而下调免疫反应。脂多糖与免疫球蛋白的共同刺激可将腹腔巨噬细胞活化为抗炎型巨噬细胞。

固定已处死的小鼠，沿腹腔进行纵向切口。将皮肤从腹肌上拉开。向腹腔内注射缓冲液；轻轻振荡以使细胞从腹腔脱落。

收集含有活化巨噬细胞的腹腔液。

将这些活化的巨噬细胞培养在含有共刺激分子——免疫球蛋白和脂多糖的培养基中，以促进细胞因子的产生。收集用过的培养基，并使用酶联免疫吸附测定法（ELISA）定量细胞因子水平。

IL-10 浓度高于 IL-12 表明腹膜抗炎型巨噬细胞激活成功。

用1毫升注射器准备所需剂量的静脉注射免疫球蛋白和LPS，并连接26号针头。对照组则使用PBS加LPS。

用一只手抓住小鼠颈背部皮肤，同时固定其臀部和尾巴。将腹腔右下象限作为目标区域，针头斜面向上，以30至40度角刺入，进针深度约1.5 cm，随后推注药液。一小时后，处死小鼠并收集腹腔巨噬细胞。

在无菌操作台中，将已处死的小鼠四肢展开，固定于泡沫板上，并用70%乙醇消毒腹部。随后，沿中线做一约2毫米深的浅切口，剥离腹部皮肤。注意避免刺穿腹膜壁。

接下来，用 pH 7.4 的无菌 PBS 完全充满一支 5 毫升注射器，使用 25 或 27 号针头，从腹腔两侧向中线方向、针尖斜面向上的位置注入小鼠腹腔。拔出针头后，按摩腹膜 10 秒，以使细胞脱落。

现在，再次将针头插入腔内，收集约 3.75 毫升灌洗液。将灌洗液转移至预置冰上的 15 毫升锥形管中。重复注射、按摩及灌洗液收集操作三次，将所有收集的液体合并至同一管中。

在最后一次收集时，可从小鼠的对侧更方便地抽出灌洗液。接着，将细胞离心沉淀，并重悬于 500 µL 铺板培养基中。然后，计数活的巨噬细胞，并将其重悬至每毫升含 100 万个细胞。现在，将 100 µL 悬液接种至 96 孔平底板的各孔中。接着，将细胞孵育 1 小时。

腹腔巨噬细胞将贴附于培养板上。随后，去除未贴壁的细胞，每孔用200微升预热的IMDM培养基洗涤两次。每次洗涤后，静置10秒，然后缓慢倾斜培养板使冲洗液汇集。洗涤完成后，每孔重新加入100微升铺板培养基，并将培养板放入培养箱中。

进行ELISA时，将细胞继续孵育24小时，不进行刺激。然后，收集并澄清条件培养基，用于细胞因子分析。