抗原包被微珠激活后B淋巴细胞中的细胞器动力学

B淋巴细胞上的B细胞受体（BCR）可结合抗原，从而导致细胞活化。这会引发抗原的内化，以便加工成肽段，并与II类MHC分子结合，进而呈递给辅助性T淋巴细胞，以产生有效的免疫应答。 

研究B淋巴细胞活化 体外 使用抗原包被的微珠，首先获取抗原包被的微珠。这些微珠通过共价键结合有抗原，即B细胞受体（BCRs）的特异性配体；未结合位点由非反应性蛋白封闭，以防止B淋巴细胞的非特异性结合。

将磁珠加入B淋巴细胞悬液中。将混合物接种到多聚-L-赖氨酸包被的盖玻片上。

带负电荷的B淋巴细胞与带正电荷的盖玻片结合，从而固定细胞。此外，微珠上的抗原特异性地与BCR结合。BCR与抗原的相互作用激活B淋巴细胞，形成紧密连接——即免疫突触。

这种相互作用会启动细胞内信号通路，导致肌动蛋白细胞骨架的重组。这会引起细胞膜的伸展，随后发生收缩，在此过程中，BCR-抗原微簇会聚集于免疫突触的中心。

随着肌动蛋白的重塑，中心体（微管组织中心）会重新定位至免疫突触附近。这种重新定位将溶酶体和高尔基体等细胞器招募到免疫突触附近，以摄取并呈递抗原。

通过将特异性配体与经戊二醛处理以活化氨基的氨基化微珠孵育，制备抗原包被的微珠。将活化的微珠重悬于100 µL PBS中，并涡旋振荡。同时，在150 µL PBS中加入100 µg/mL的BCR配体，制备抗原溶液。

接下来，将50 µL活化磁珠加入抗原溶液中，在4°C下孵育过夜。注意，同时使用无关配体作为阴性对照。孵育结束后，用PBS洗涤磁珠，吸去上清液后更换为PBS，重复洗涤三次。接着，将磁珠重悬于500 µL BSA溶液中，以封闭游离的氨基。最后，将磁珠重悬于70 µL PBS中。

为计算最终浓度，可使用血细胞计数板对磁珠进行计数。进行B细胞活化时，使用50 ml离心管，将细胞重悬于CLICK培养基中，浓度为每毫升150万个细胞，并添加5%胎牛血清。接着，取100微升细胞-磁珠混合物（对应15万个B细胞），加入多聚-L-赖氨酸包被的盖玻片中，于37摄氏度孵育不同时间点。