抗C-fms抗体对小鼠骨髓细胞体外破骨细胞生成的影响

破骨细胞生成是破骨细胞前体分化并融合形成多核破骨细胞的过程。

研究抗c-fms抗体对破骨细胞生成的影响 体外取一个含有小鼠骨髓细胞悬液的培养皿，加入巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）。

在培养过程中，M-CSF 与髓系前体细胞上的特异性受体 c-fms 结合，激活信号通路，诱导其分化为骨髓巨噬细胞（BMMs）。BMMs 是破骨细胞的前体细胞，可贴附于培养板上。

去除非贴壁细胞，收集BMMs并接种至多孔板的孔中，加入M-CSF和核因子κB受体活化因子Β 配体，RANKL。

向孔中加入浓度递增的抗-c-fms 抗体。

在对照孔中，  M-CSF 与 c-fms 受体结合，激活信号通路，刺激 RANK 受体表达，并促进骨髓来源巨噬细胞（BMM）的存活与增殖。RANKL 与 RANK 受体结合，触发信号级联反应，导致 BMM 分化并融合形成破骨细胞。

在抗体浓度较高的孔中，抗体结合并有效阻断 c-fms 受体，干扰破骨细胞分化所需的信号传导，从而抑制破骨细胞的形成。

通过染色鉴定并定量破骨细胞群体，确定有效抗体浓度以抑制RANKL诱导的破骨细胞形成。

在10厘米培养皿中接种一千万个细胞，每10毫升加入M-CSF。于37°C、5%二氧化碳条件下培养3天。3天后移除培养基，用10毫升PBS剧烈冲洗细胞两次，以去除非贴壁细胞。

加入 5 毫升室温的含 0.02% 胰蛋白酶-EDTA 的 PBS，于 37 摄氏度、5% 二氧化碳条件下孵育 5 分钟。用移液器充分吹打细胞以使其脱离。在显微镜下观察培养物，确认细胞已脱离并呈圆形悬浮于培养基中。

待细胞脱落后，加入5毫升α-MEM培养基以终止反应。将细胞收集至50毫升锥形离心管中，在300 × g 条件下离心5分钟。弃去上清液后，用5毫升α-MEM洗涤细胞沉淀，再次在300 × g 条件下离心5分钟。将沉淀重悬于10毫升α-MEM培养基中。

在10厘米培养皿中，每10毫升接种100万个细胞，并加入M-CSF。于37°C、5%二氧化碳条件下培养3天。收集贴壁细胞，此即培养3天后的BMMs，作为破骨细胞前体。将BMMs以每孔200微升α-MEM培养基接种于96孔板，每孔接种5万个细胞。

向每个孔中加入所需的刺激物，然后加入M-CSF，使其终浓度为100纳克/毫升。向每个孔中加入抗c-fms抗体。将培养板置于37摄氏度、5%二氧化碳条件下孵育4天，每隔一天更换一次培养基，共更换两次，随后按照文中所述进行染色和检测。