0 次观看 • 3:52 分钟 • July 8th, 2025
在体视显微镜下，将麻醉的野生型和Dicer-2突变型雄性Drosophila置于注射皿中。确保果蝇不携带任何可抑制RNA病毒复制的共生细菌。
使用含有正义单链RNA病毒悬液的纳米注射器对果蝇进行胸腔内接种。
病毒进入宿主细胞 通过 受体介导的内吞作用及复制产生双链中间体RNA。宿主模式识别受体Dicer-2将病毒双链RNA加工成小干扰RNA（siRNA）。
siRNA 与 RNA 诱导的沉默复合体（RISC）结合， 其中其互补链被移除。装载到RISC中的siRNA会结合其他病毒RNA 通过 互补碱基配对，导致病毒RNA降解和基因沉默。
Dicer-2 与病毒 RNA 的相互作用可激活下游抗病毒信号级联反应，从而产生抗病毒蛋白。这些抗病毒蛋白与邻近宿主细胞的 Janus 激酶（即 JAK）蛋白结合的细胞因子受体相互作用，启动受体二聚化及 JAK 磷酸化。
活化的JAKs会磷酸化并激活STAT蛋白（一种信号转导子和转录激活因子）。活化的STAT蛋白转位至细胞核内，结合特定的DNA序列，启动抗病毒反应基因的转录。
将果蝇培养至所需时间。
下游分析表明，Dicer-2 突变果蝇的存活率降低，病毒载量增加。
进行病毒感染实验时，首先使用体视显微镜和细镊子将玻璃毛细管针头的尖端折断至适合纳米注射的合适直径。组装注射器时，将密封O型环和白色垫片安装到注射器的金属推杆上，确保较大的凹面朝向外侧。
使用带有30号针头的注射器将矿物油注入玻璃针中，并将针头穿过套管。将较大的O形环置于套管基部，距离针头钝端约1毫米处，然后将针头安装到注射器的推杆上。
将针头固定在推杆上，按下空按钮，伸出显微注射器的推杆，直至听到可听见的信号。然后按下填充按钮，使推杆回缩5毫米，并将针头浸入含有100个噬斑形成单位的病毒悬液中。轻轻摇动一管或至少三管不含Wolbachia的雄性Drosophila，将其倒入注射培养皿中。
首选雄性果蝇，因为交配和繁殖过程中的激素变化可能会影响雌性果蝇的实验结果。
然后，将每只果蝇的胸部在中胸侧片与后胸侧片之间颜色略浅的区域注射 50.6 纳升病毒溶液，并通过细胞病变效应实验及定量 RT-PCR 检测研磨后果蝇中的 DCV 载量，方法如前所述。注射后，小心将果蝇转移至新的培养管中，并将培养管水平放置，以防止果蝇在麻醉恢复期间粘附于培养基上。