0 次观看 • 3:50 分钟 • July 8th, 2025
葡聚糖硫酸钠（DSS）可诱导结肠炎——一种炎症性肠病，其特征是肠道上皮屏障破坏导致炎症发生。
为评估组织损伤，取自DSS诱导结肠炎小鼠模型中分离的固定结肠组织。将组织浸入包埋介质中以便于切片，并迅速冷冻。
使用冷冻切片机获取薄组织切片，并将其收集到玻片上。
将玻片浸入含有氧化苏木精染料与媒染剂（一种金属阳离子）结合的溶液中，使染料带正电荷。染料-媒染剂复合物与带负电荷的DNA结合，将细胞核染成紫红色。
将组织浸入分化酸酒精溶液中，去除细胞质和细胞外基质中非特异性结合的染料。用蓝化剂——一种碱性介质——冲洗组织，使细胞核呈现蓝色，从而增强对比度。
将切片浸入浓度递增的酒精中，以脱去组织中的水分，增强复染剂的渗透。
将组织浸入复染剂——酸性伊红溶液中，使碱性细胞质蛋白和细胞外基质呈现粉红色。用酒精冲洗载玻片以去除多余的伊红。将组织浸入二甲苯中，使组织透明，以便更好地进行显微镜观察。
在显微镜下，结肠切片显示出加重的组织损伤，表明为DSS诱导的结肠炎。
对于分离的结肠组织进行苏木精和伊红染色，次日清晨，将组织块分别放入含有30%蔗糖的PBS溶液中，置于15毫升离心管内，4℃过夜浸泡，以实现样本的冷冻保护。第二天，将组织包埋于最佳切割温度（OCT）包埋剂中，并在-20°C条件下冷却，直至OCT完全凝固。
将OCT包埋块放入冷冻切片机中，设置切片厚度为12微米，然后切取12微米厚的冷冻切片，并将其收集到载玻片上。所有组织切片完成后，将载玻片置于65摄氏度的加热板上温育20分钟，随后用蒸馏水短暂清洗加热后的切片，再用苏木精染色液染色5分钟。
用流动的自来水冲洗切片5分钟，以去除多余的苏木精溶液，然后用0.5%乙醇盐酸分化30秒，再用流动的自来水冲洗1分钟。接着，将样本在PBS中洗涤1分钟，随后再次用流动的自来水洗涤5分钟。
洗涤结束后，将组织浸入梯度升高的乙醇系列中，每次浸入持续10秒，随后用伊红复染2分钟。为使样本脱水，将切片依次浸入95%乙醇以及两次100%乙醇中，每次浸入5分钟，然后用二甲苯透明处理，每次5分钟，共更换两次。随后，对各实验组近端、中段和远端结肠的组织损伤进行评分。