0 次观看 • 3:35 分钟 • July 8th, 2025
细菌生物膜是由细菌群落及其自身产生的胞外基质共同构成的三维结构，能够逃逸宿主的免疫应答。
对于 体外 金黄色葡萄球菌 生物膜制备，转移处于对数生长期的 金黄色葡萄球菌 将所需细胞密度的悬液加入多孔板的聚-L-赖氨酸包被孔中。
在静态条件下孵育时，带正电荷的聚-L-赖氨酸涂层可与细菌表面带负电荷的糖聚合物（如壁磷壁酸）发生静电相互作用，促进细菌的黏附。
在存在可利用营养物质的情况下，Staphylococcus aureus 会进行分裂并不断积聚，形成微菌落。此外，细菌会分泌一种由多糖、蛋白质和细胞外DNA组成的胞外基质，该基质包裹着细菌细胞，促进细菌间的黏附以及对表面的黏附。
随着细胞不断分裂和基质分泌，生物膜逐渐成熟，形成三维结构，有利于信号分子的有效分布，实现细胞间的通讯。
当达到一定细菌密度阈值时， 金黄色葡萄球菌 分泌蛋白酶和核酸酶，降解生物膜基质并释放少量 金黄色葡萄球菌 加入培养基中。移除含有游离浮游细菌的培养基。
轻柔地加入缓冲液以防止生物膜被破坏。移除含有未贴附细菌的缓冲液。
生成的生物膜已准备好用于后续实验。
首先，使用划线平板技术从冷冻保存的菌种中获取金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的单菌落，接种于营养丰富的琼脂平板（如胰蛋白胨大豆琼脂平板）上。将聚赖氨酸（PLL）用无菌水稀释后，每孔加入100 µL至96孔板的各个孔中，室温孵育30分钟。使用真空辅助的吸液装置无菌吸除PLL溶液。随后将各孔在室温下过夜干燥。
接种一环金黄色葡萄球菌（S. aureus）至添加了2%葡萄糖的MEM-alpha培养基中，制备过夜培养物，并于37摄氏度、200转/分钟条件下培养16至18小时。将过夜培养物取50微升转移至5毫升新鲜的含2%葡萄糖的MEM-alpha培养基中进行稀释，然后于37摄氏度、200转/分钟条件下继续培养，直至达到对数中期。使用MEM-alpha培养基将对数中期菌液调节至OD值为0.1。
将150微升标准化培养物转移至经PLL处理的96孔板的每个孔中。将该板置于37摄氏度的湿化培养箱中孵育18至20小时。吸除上清液以去除浮游细胞。用150微升HBSS轻轻洗涤残留的生物量，以去除未贴壁的细胞。重复至少两次，以彻底清除所有浮游细胞。