一种通过脓毒针刺技术在果蝇中诱导全身性细菌感染的方法

0 次观看2:36 分钟 • July 8th, 2025

为了研究果蝇(Drosophila)对致病性微生物的免疫反应,取含有活细菌病原体的悬浮液。将无菌针头浸入该悬浮液中,蘸取少量细菌。

将一只麻醉的果蝇置于解剖显微镜下。用感染的针头在果蝇胸部的胸侧板处刺入,该刺入操作可将细菌引入血淋巴——即体腔内的循环液体。

将感染的果蝇放入含有果蝇食物的小瓶中,并在适当条件下维持足够的时间。

细菌利用血淋巴作为丰富的营养来源进行增殖,从而导致全身性感染。血淋巴中含有血细胞,即循环的免疫效应细胞。

血淋巴还与脂肪体相关,脂肪体是一种用于能量储存的特化组织。脂肪体细胞上的模式识别受体与细菌相互作用,这种相互作用可诱导细胞分泌抗菌肽,从而介导细菌的杀灭。

循环血细胞与细菌相互作用 通过 吞噬受体,导致细菌被内吞进入吞噬体,并最终被降解。

部分病原体可逃避宿主的免疫反应,导致果蝇死亡。

监测果蝇的死亡率,并进行下游实验以评估其对病原体的免疫反应。

准备感染用针:将200微升微量移液器吸头的末端熔化,插入一根0.15毫米的昆虫微细针,并使塑料冷却固化,从而固定针的位置,确保有0.5厘米的针尖从塑料中伸出。

用二氧化碳麻醉果蝇,并用针头刺入果蝇胸部的胸骨侧板,注意避开翅膀和足部的附着位置。使用软镊子将果蝇从微细针上取下。确保在每只果蝇接种前都将针头浸入细菌悬液中。

将刺破的果蝇放入装有新鲜培养基的新培养瓶中,并将培养瓶侧放,直到所有果蝇从麻醉状态中恢复。