测定病毒感染剂量的实验方法 果蝇 培养昆虫细胞中的C病毒

Drosophila C病毒（DCV）是一种常见的正链单链RNA病毒，可感染黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）。

感染过程中，DCV利用宿主细胞的机制复制病毒基因组，最终产生病毒颗粒。感染的细胞表现出细胞病变效应（CPE），并发生裂解，或因无法分裂而无裂解性死亡。

为了确定平均病毒组织培养感染剂量，即在半数感染细胞中出现细胞病变效应（CPE）时的DCV浓度，需从连续稀释的DCV悬液开始。

转移至含有半贴壁细胞的多孔板 黑腹果蝇 源自晚期胚胎的S2*细胞 黑腹果蝇，一种天然的DCV宿主。含有培养基和细胞的孔作为阴性对照。

孵育以使病毒感染细胞。病毒感染的细胞会表现出细胞病变效应（CPE）。 通过 细胞损伤与死亡。孵育结束后，在显微镜下观察各孔。

在不同稀释度下鉴定CPE阳性和阴性孔。采用适当方法测定DCV的平均病毒组织培养感染剂量。

为了确定平均病毒组织培养感染剂量，首先将1 × 10⁵个S2 star细胞接种到96孔板中，每列12行，每孔加入100微升完全培养基，每列8个孔。然后将培养板放回25摄氏度的培养箱中。

从-80摄氏度保存条件下随机选取五管病毒。在细胞沉降的同时，将10个无菌的1.5毫升微量离心管中各加入450微升无菌完全培养基，并向第一个含有450微升无菌完全培养基的1.5毫升离心管中加入50微升病毒原液，逐管进行十倍系列稀释至第12孔。

孵育结束后，将每种稀释液各50微升加入对应病毒管的每列相应孔中，并在每列中加入50微升不含病毒的培养基作为阴性对照孔。然后，将培养板置于25摄氏度培养箱中培养三天，每天在20倍放大倍数的明场显微镜下观察每种病毒储备液的细胞病变效应。

将细胞形态模糊且培养基中充满碎片的孔判定为阳性孔，将细胞形态正常的孔判定为阴性孔。