从人源性中性粒细胞中分离脂质的双相分离法

取一支含有中性粒细胞匀浆液的玻璃管，其中包含已释放的细胞内组分。

 加入甲醇，一种极性溶剂，可破坏脂质-脂质和脂质-蛋白质之间的相互作用。甲醇的固有极性能够使极性脂质均匀分布，从而实现溶解。接下来，加入氯仿，一种非极性有机溶剂，可与非极性脂质相互作用，使其分散并溶解。

离心以分离含有蛋白质的沉淀物与含有脂质、多糖和细胞碎片的上清液。将上清液转移至新的玻璃管中。加入氯仿和蒸馏水。离心样品。

加入水后会自发形成两相体系，生物分子被分配在下层的氯仿相和上层的水-甲醇相中。

氯仿层含有溶解的非极性脂质，而上层则包含非脂质污染物和极性更强的脂质。移走上层的水-甲醇层时，注意不要扰动含有脂质的下层。

使用真空浓缩仪去除脂质中的溶剂。储存于较低温度下，待后续使用。

为了从人外周血来源的中性粒细胞中分离脂质，取制备好的中性粒细胞并置于冰上。用移液器将中性粒细胞转移至带有聚四氟乙烯（PTFE）密封垫的15毫升螺口玻璃管中，并通过振荡1分钟进行匀浆。随后加入2毫升甲醇，1分钟后加入1毫升氯仿。再振荡1分钟后，将玻璃管在室温下以50 RPM转速旋转30分钟。

接下来，将溶液在7摄氏度、1952 × g 条件下离心，使蛋白质组分沉淀 g 10分钟。小心地将上清液倾入新的15毫升玻璃螺口管中，留下含有蛋白质的沉淀。将沉淀物于-20摄氏度保存，以备后续定量分析。

加入1毫升氯仿，静置1分钟。然后加入1毫升双蒸水，将含有样品的玻璃螺口管颠倒混合30秒。按之前方法离心样品后，移除并弃去上层液相，但不要触及浑浊层。在60摄氏度下用真空浓缩仪将样品干燥，并于-20摄氏度保存直至使用。