一种基于渗透膜插入物的感染系统,用于研究细菌毒素的影响

0 views • 3:28 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

取一个由可渗透膜插入物隔开的双腔感染系统。底部隔室含有粘附的人类角质形成细胞或皮肤细胞。

上室中加入细菌病原体,孵育。该膜可防止病原体与角质形成细胞直接接触。病原体会分泌链球菌溶血素 S 或 SLS(一种小毒素),穿过细胞膜到达细胞。

角质形成细胞上的碳酸氢钠协同转运蛋白介导碳酸氢钠和钠离子的流入,维持细胞内 pH 值。SLS 与协同转运蛋白结合并破坏离子转运,导致细胞内渗透应激。

应激诱导的下游信号传导导致与隔离的核因子-Kappa B 或 NF-κB 结合的抑制剂降解,从而导致其激活。激活的 NF-κB 易位到细胞核,导致促炎细胞因子的产生上调。

细胞外分泌后,细胞因子与宿主细胞上的死亡受体结合,引发坏死。孵育后,收获培养上清液以评估细菌毒素的影响。

在治疗前,立即使用 1X PBS 洗涤细胞。然后,将 2 毫升新鲜生长培养基(有或没有药物处理)施用于六孔板,或将 0.5 毫升培养基施用于 24 孔板的孔中。接下来,在层流罩下,使用无菌镊子小心地将无菌的 0.4 微米可渗透膜插入物进入每个孔中。

感染准备过程中,对渗透性插入物进行温和无菌处理对于防止膜在此过程中受到损害或污染至关重要。

根据制造商的说明,将新鲜细胞培养基应用于每个孔的上室。然后,将适量的标准化细菌培养物应用于可渗透膜插入系统的上室,并将细菌培养基应用于对照孔。

小心地将细菌添加到上室,以及将受感染的细胞温和地运输到培养箱中,至关重要,因为在实验设置期间细菌不会污染下室至关重要。

要评估分泌的宿主蛋白,请使用无菌镊子小心地取出可渗透膜插入物。然后,在不干扰单层细胞的情况下,将培养基从下室收集到 1.5 毫升管中。

样品在 14,000 RCF 和 4 摄氏度下离心 10 分钟,以沉淀细胞碎片。然后,除去除 50 微升外的所有上清液,转移到新鲜的 1.5 毫升管中,并在零下 20 摄氏度下储存,或立即使用。

07:20

人类舱内单聚物研究病原体、共脉和宿主肠道上皮细胞之间的相互作用

Related Videos

0 Views

07:40

使用酵母毒性和抑制器屏幕识别细菌效应蛋白的宿主通路

Related Videos

0 Views

08:17

利用利什曼原虫破译毛孔形成毒素的分子机制和功能

Related Videos

0 Views

10:41

表面等离子体共振检测到宿主细胞质的毒素易位

Related Videos

0 Views

14:29

细菌毒素引起的响应,用活细胞荧光显微镜的可视化

Related Videos

0 Views

04:15

从在可渗透膜系统中培养的受感染宿主细胞中提取宿主细胞裂解物

Related Videos

0 Views

10:39

单细胞测量液泡破裂引起细胞内病原体

Related Videos

0 Views

08:51

施加诱导表达系统研究与细胞内信号细菌毒力因子的干扰

Related Videos

0 Views

09:58

人体血液,脑脊液屏障的脉络丛上皮基于Cell的产品型号从基底外侧面研究细菌感染

Related Videos

0 Views

09:25

基于插入渗透膜感染系统的实现研究分泌细菌病毒对哺乳动物宿主细胞的作用

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026