马拉色菌诱导的小鼠模型皮肤炎症及真菌负荷分析

马拉色菌是一种机会性致病真菌，定植于小鼠表皮——即最外层的皮肤。当皮肤屏障受损时，该真菌可侵入表皮，引发炎症反应。

为了评估 马拉色菌诱导的皮肤炎症，准备一只耳部皮肤受损且表皮屏障被破坏的麻醉小鼠。

测量耳朵的厚度并施加 马拉色菌 将油性悬液涂抹于受伤的耳部。该油剂有助于 马拉色菌皮肤吸收，而伤口则使真菌得以侵入表皮，引发感染。

在表皮内，朗格汉斯细胞和角质形成细胞上的模式识别受体与真菌细胞壁组分相互作用。相互作用后，这些细胞释放促炎性细胞因子，细胞因子扩散至真皮层并扩张真皮血管。这会促进白细胞浸润和感染部位的液体积聚，导致组织水肿和耳部肿胀。耳部厚度的增加与炎症程度相关。

解剖耳部组织并进行匀浆以释放细胞内物质，包括马拉色菌。将匀浆后的悬液涂布于含有培养基的琼脂平板上，并进行培养。此过程可使单个真菌生长形成明显的菌落。

平板上的菌落数量反映了皮肤炎症中的真菌负荷。

为建立马拉色菌（Malassezia）感染模型，首先确认已麻醉的6至8周龄雌性C57/Black/6小鼠对足底反射无反应，并在动物眼睛上涂抹眼膏。使用卡尺测量双耳各两个不同区域的耳部厚度，以计算每只耳朵的平均厚度。随后，将一小片胶带贴于一只耳朵的皮肤上，然后使用新的胶带连续快速剥离耳部皮肤五次。

脱毛后，使用无菌移液器将100 µL的马拉色菌橄榄油悬液涂抹于每只耳朵的背侧，并在颈背部皱褶处皮下注射200 µL无菌预温的2%葡萄糖溶液，以支持代谢和再水化。随后，将小鼠置于加热垫上恢复30分钟，并进行监测，之后将其放回笼中。

在适当的实验时间点，使用游标卡尺测量每只小鼠耳朵的两个不同区域，以计算每只耳朵的平均厚度。为了测定感染皮肤中的真菌载量，将 500 微升无菌 0.05% NP40 和蒸馏水加入一个灭菌的 5 毫米直径钢球中，每只耳朵对应一个 2 毫升微量离心管，然后用天平称量每个试管的重量。

接下来，从每只动物的基部采集耳组织，并将组织放入含有 NP40 的独立离心管中。用天平称量每根离心管，以确定各耳组织样本在匀浆前的重量，随后在 25 赫兹条件下匀浆 6 分钟。然后，取 100 微升每份样本滴加到 m-Dixon 琼脂平板上，并将悬浮液在琼脂表面均匀涂布，之后将平板倒置，在 30 摄氏度下进行培养。