一种完全分化的单核细胞来源巨噬细胞感染模型 结核分枝杆菌

在多孔板中培养完全分化的巨噬细胞。这些巨噬细胞具有表面标志物，例如Toll样受体或TLR-2——一种可识别多种微生物组分的模式识别受体。

向每个孔中加入适量的荧光标记结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）或 Mtb 细胞悬液，并进行孵育。

TLR-2 识别分枝杆菌细胞壁中的复杂糖脂成分脂阿拉伯甘露聚糖（lipoarabinomannan，LAM），从而启动吞噬作用。巨噬细胞将结核分枝杆菌（Mtb）内化，将其隔离于吞噬体——一种由膜包被的区室内。

吞噬体通过与溶酶体融合而成熟，形成吞噬溶酶体——一种酸性且富含酶的区室。

在吞噬溶酶体内，结核分枝杆菌（Mtb）抑制了负责产生酸性pH的液泡型质子泵。因此，吞噬溶酶体内的pH接近中性，导致降解被吞噬病原体的酶失活。

LAM 与 TLR2 之间的相互作用也会影响宿主细胞的信号通路，从而调控参与抗原呈递的表面标志物。

吞噬溶酶体的失活以及对宿主免疫反应的抑制使结核分枝杆菌（Mtb）能够在巨噬细胞内存活并复制。

为了感染单核细胞来源的细胞，将细菌用无血清培养基稀释至浓度为每毫升5 × 10⁶ 菌落形成单位，然后将六孔细胞培养板中每孔的上清液更换为1毫升新鲜无血清培养基和1毫升细菌悬液，使感染复数达到5。

在细胞培养箱中孵育4小时后，每次用1毫升无菌洗涤缓冲液洗涤每个孔，共洗涤三次，每次洗涤后轻轻倾斜培养板，以彻底清除各孔角落的缓冲液。然后，将感染结核分枝杆菌的单核细胞来源细胞重悬于2毫升不含抗生素的完全培养基中。