确定玻璃粘连蛋白在细菌抵抗人血清杀菌活性中的作用

0 次观看2:55 分钟 • July 8th, 2025

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为了研究玻璃粘连蛋白(一种人血清糖蛋白)对细菌的影响,首先准备含有流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)悬液的试管。

用含有玻连蛋白的正常人血清处理其中一支试管,另一支则用去除玻连蛋白的血清处理。这两种血清均含有抗体和多种补体蛋白——这对杀菌活性至关重要。

孵育期间,抗体与细菌表面蛋白相互作用,激活补体蛋白形成C5转化酶,后者裂解C5。C5b与C6结合,随后结合C7,形成C5b6-7复合物。该复合物结合至细菌细胞膜,并招募C8,形成C5b67-8复合物。

该过程促进C9单体的结合及其聚合,形成膜攻击复合物——一种成孔结构。这些孔道导致离子和水的内流,从而引起细菌裂解。

相比之下,在含有正常血清的试管中,玻璃粘连蛋白会结合到细菌表面的一种蛋白质,该蛋白质可与 C5b6-7 复合物及 C9 单体相互作用。这些相互作用阻止了 C8 的招募以及 C9 的聚合,从而抑制膜攻击复合物的形成,导致细菌得以存活。

从两支试管中分别取出细菌悬液,并接种到各自的琼脂平板上进行培养。

在含有玻璃连接蛋白的血清中,细菌菌落数量更高,证实了该蛋白在细菌抵抗人血清杀菌活性中的作用。

为进行玻璃粘连蛋白依赖性抵抗人血清杀菌活性的分析,首先按照文本方案中所述培养并收集细菌。离心后,用1体积的葡萄糖明胶巴比妥缓冲液重悬细菌沉淀。然后将1,500 CFU的细菌加入含5%血清的100微升DGVB++中。

将样品在37摄氏度下振荡孵育15分钟,转速为300 RPM。分别在0分钟和15分钟时从反应混合物中取出10微升等分试样。将等分试样接种至巧克力琼脂平板上,并在37摄氏度下过夜培养。巧克力琼脂平板孵育结束后,计数平板上出现的菌落,并按照文本方案中所述方法计算被杀灭细菌的百分比。

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最后更新:15 八月 2026