0 次观看 • 4:51 分钟 • July 8th, 2025
将宫颈子宫黏膜置于培养皿中。从黏膜下层分离宫颈外口和宫颈管黏膜。将黏膜层切成较小的组织块，并转移至锥形管中。
将人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）加入外植体管中。HIV-1病毒颗粒接近暴露的黏膜层，并与宿主细胞上的CD4受体及CXCR4共受体结合。
病毒结合后，其包膜与宿主细胞膜融合，将含有病毒RNA和逆转录酶的病毒衣壳释放到细胞质中。在细胞质内，逆转录酶将病毒RNA转化为互补DNA（cDNA）。
互补DNA进入宿主细胞核，在此处整合酶将病毒DNA整合到宿主基因组中。病毒DNA指导合成新的病毒RNA和蛋白质，这些成分组装成新的病毒颗粒。这些颗粒从宿主细胞出芽，获得脂质包膜。
用适当的缓冲液冲洗外植体，以去除未结合的病毒。最后，将外植体置于多孔板中含适当培养基的明胶海绵上，并进行培养。
气液界面通过海绵状毛细血管最大化氧气暴露和营养物质的可及性，从而增强模型在下游分析中的存活能力。
使用培养皿的盖子作为切割表面来解剖组织。用镊子轻轻夹住组织，用手术刀片将外宫颈和/或内宫颈的黏膜层与下方的间质及黏膜下层分离，以获得黏膜条。将黏膜切成宽度为 2 毫米的条状。尽可能去除并丢弃黏膜下层，仅保留约 2 毫米厚的组织层。然后，将这些条状组织进一步切成厚度为 2 毫米的组织块。
将组织外植体转移至一个新的含有10至20毫升CMT的100毫米培养皿中，以防止在继续解剖过程中组织干燥。解剖结束后，轻轻旋转培养皿使外植体分布均匀。用无菌镊子将外植体转移至无菌的1.5毫升锥形管中。使用移液器移除管中的任何培养基。
为了获得最佳结果，宫颈外植体应在手术后尽快进行处理和感染，最好在手术当天进行。或者，组织可在4摄氏度下浸没于CMT中过夜保存，并在解剖后立即进行感染。
将HIV-1样品在37摄氏度水浴中解冻。解冻后，将病毒转移至含有外植体的试管中。将试管放入恒温振荡器，于37摄氏度孵育2小时，以300 RPM振荡。每隔30至60分钟，轻轻翻转试管数次。
同时，向六孔板的每个孔中加入 3 至 4 毫升无菌磷酸盐缓冲液。HIV-1 孵育结束后，使用移液器将含有外植体的试管中的全部病毒液弃入含消毒液的容器中。然后，使用镊子和移液器将外植体转移至含有 PBS 的六孔板中。
在室温下将外植体置于 PBS 中静置 1 分钟后，用移液器轻轻吹打 PBS 上下混合 2 至 3 次，清洗外植体。然后用移液器将 PBS 弃入含有消毒液的容器中。向每个孔中加入 3 至 4 毫升新鲜 PBS。重复上述操作再清洗两次，共完成三次清洗。在将外植体转移至海绵前，立即弃去 PBS，以避免组织干燥。
现在，使用镊子将5至8个外植体转移至12孔板中每个明胶海绵的表面。将该板放回培养箱中。