一种通过哺乳动物系统生成流感病毒样颗粒的技术

病毒样颗粒或 VLP 模仿病毒结构，但缺乏病毒遗传物质，使其无毒力。VLP 具有免疫细胞识别的表面结合抗原表位，使其成为理想的候选疫苗。

要生成重组流感 VLP，请使用真核表达载体。

两个载体包含编码血凝素 （HA） 和神经氨酸酶 （NA） 的基因，即流感病毒的结构蛋白。第三个载体包含gag基因，编码人类免疫缺陷病毒的核心蛋白。

添加基于阳离子脂质的转染试剂。带正电荷的脂质头基与带负电荷的 DNA 相互作用，在载体周围形成双层——产生脂质体转染复合物。

将复合物添加到适合 VLP 生产的培养哺乳动物宿主细胞上，并孵育。转染复合物通过内吞作用进入细胞——脂质体膜与内体膜融合，将载体释放到细胞质中。

载体进入细胞核，导致病毒基因表达。在内质网上合成 HA 和 NA 后，蛋白质通过分泌途径易位到质膜。

核心蛋白在细胞质中合成并转运到组装位点以锚定在质膜上。积累的病毒成分从宿主细胞中自组装成VLP和芽。

收集已释放的 VLP 以进行下游处理。

转染当天，根据制造商的建议准备脂质体和 DNA 溶液。用 1：1：2 的 HA：NA：Gag 的 DNA 组成转染 DNA 细胞，每个 T-150 烧瓶的 DNA 总量为 40 微克。重复此步骤以创建 9 个 T-150 烧瓶，总体积为 200 毫升。

接下来，在不含抗生素的无血清转染培养基中稀释DNA和脂质体溶液，使每个烧瓶的总体积为24毫升。将烧瓶放回培养箱中，并将细胞保持在转染培养基中，直到病毒样颗粒或VLP收获之日。

染后 72 至 96 小时后，将上清液转移到 15 毫升锥形管中，以从细胞中收获培养物。将细胞向下旋转以沉淀细胞碎片。收集上清液并通过 0.22 微米孔膜过滤。