0 次观看 • 3:41 分钟 • July 8th, 2025
将麻醉后的小鼠置于连接有持续氧气和麻醉气体气流的呼吸装置的无菌手术垫上。
使用滤器将无菌空气吸入注射器中。在注射器上安装针头，将无菌空气皮下注射到小鼠背部，以在组织层间形成一个气囊。观察小鼠直至其恢复。
重新麻醉小鼠，并将脂多糖（LPS）注入气囊中。LPS 会结合组织驻留的巨噬细胞和树突状细胞上的 Toll 样受体 4（TLR-4），从而激活这些细胞。
活化的细胞会释放多种炎性介质，如细胞因子和趋化因子，这些介质可招募中性粒细胞及其他免疫细胞。这些介质还可增加邻近血管的通透性，使免疫细胞和可溶性因子能够从血液进入气囊。
随着液体在囊袋内积聚，会形成一种渗出液，其中包含炎性细胞和多种生物活性分子。
处死小鼠，并向气囊中注入适量的洗涤缓冲液。将炎性渗出液收集至微量离心管中，离心。弃去上清液，将细胞重悬于洗涤缓冲液中。
分析炎性渗出物，以定量中性粒细胞比例并确定其浸润程度。
在第0天对小鼠进行麻醉后，使用连接在5毫升注射器上的0.22微米滤器获取3毫升无菌空气。用镊子提起麻醉小鼠背部的皮肤，通过26号、3/8英寸长的针头皮下注射3毫升无菌空气。
处理后，将小鼠从呼吸装置中取出，并放入准备妥当的笼子中。监测小鼠，确保其存活直至开始活动。在第三天，向先前建立的气囊中额外注射三毫升无菌空气，以维持气囊结构。
第6天，将不同的处理物质注射到气囊中。注射1毫升磷酸盐缓冲液（PBS）作为阴性对照，注射1毫升浓度为1微克/毫升的脂多糖（LPS）作为阳性对照，以诱导局部炎症反应。6小时后，处死小鼠。
每个气囊中注入一毫升洗涤缓冲液，以冲洗气囊并收集炎性渗出物至一个15毫升离心管中。随后，用两毫升洗涤缓冲液对气囊冲洗两次，每次均将炎性渗出物收集至同一离心管中。
在室温下以 100 × g 离心 10 分钟。弃去上清液，并将细胞重悬于 1 毫升洗涤缓冲液中。使用全自动血液分析仪对细胞进行计数，以定量中性粒细胞比例。