定量分析 幽门螺杆菌 加载感染的小鼠胃组织

为了定量测定感染小鼠胃中幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）的定植情况，首先取包含胃体和幽门区的展平胃组织，将其悬浮于营养培养基中以维持细菌活性。

通过匀浆破坏胃组织及其黏液层，使Helicobacter pylori从组织中释放到培养基中。使用培养基对所得胃匀浆液进行系列稀释。

获取已分隔成多个区域的干燥马血琼脂（HBA）平板，该琼脂平板中添加了抗生素混合物。将每种匀浆稀释液分别接种到平板的不同区域，并均匀涂布。

干燥后，将平板倒置放入含有特殊气体混合物的加湿厌氧培养罐中。孵育。

厌氧培养罐提供的微需氧环境结合HBA营养物质，有助于幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）生长并形成菌落。HBA中的抗生素可抑制内源性胃部微生物群中其他细菌物种的生长。

计数 幽门螺杆菌 HBA平板上处于特定可计数范围内的菌落。

计算胃组织中Helicobacter pylori的载量，以指示细菌在组织内的定植程度。

为了计算感染后胃内可存活的H. pylori数量，将保存在BHI中的胃组织样本进行匀浆处理，并用新鲜无菌肉汤对所得胃匀浆液进行连续倍比稀释，每个稀释度设两个重复。

将添加了额外抗生素的预干燥马血琼脂（HBA）平板分为三至四个区域，采用Miles和Misra技术的改良方法，将每种胃组织匀浆稀释液10至100微升分别接种到各琼脂平板的一个区域上。使用无菌塑料接种环涂布匀浆液，并让平板晾干。随后，将平板倒置于厌氧气体罐中，罐内放置一个盛有水的培养皿和气体发生包，于37°C培养4至7天。

当观察到菌落时，计数含有10至100个孤立菌落的区域。