一种在离体器官培养中建立细菌感染模型的技术

取一个在细胞外基质（ECM）上培养的人类胎盘器官培养物。

该培养物呈现出类似绒毛的结构，外层为合体层——一种多核的滋养层细胞层——下方为细胞滋养层细胞（CBT），后者可分化为植入性滋养层细胞（EVT），并锚定于细胞外基质（ECM）中。

介绍 单核细胞增生李斯特菌， 一种致病性细菌.

内部素——细菌表面蛋白——与EVT受体结合，促进细菌的内化 通过 内吞作用

内化的细菌会分泌穿孔毒素和磷脂酶，这些物质可破坏液泡膜，导致其破裂，从而使细菌逃逸至细胞质中。

逃逸的细菌招募宿主细胞的机制以进行肌动蛋白聚合，推动自身向宿主细胞膜移动。

细菌毒力因子的分泌会诱导宿主细胞膜形成突起。邻近细胞吞噬含有细菌的突起，导致感染扩散。

细菌扩散 通过 EVTs 向下方的 CBTs 迁移。

加入抗生素以清除胞外细菌，为后续分析制备感染模型。

开始感染前，从划线的脑心浸液琼脂平板上挑取单个单核细胞增生李斯特菌（L. monocytogenes）菌落，接种于3毫升脑心浸液肉汤中。将培养物于30摄氏度斜置培养过夜，使细菌生长进入稳定期。

第二天早晨，使用无菌镊子移除任何未侵入细胞外基质的漂浮器官培养组织块，并小心吸去每个transwell底部的培养基。接着，用移液器轻轻将1毫升预热的PBS加入上层和下层transwell中，清洗两次，每次清洗后均小心吸弃PBS。

第二次洗涤后，轻柔地用移液器将1毫升适当的培养基加入上层和下层的Transwell中，注意不要扰动类器官培养物，并将培养物放回培养箱中孵育1小时。

孵育结束时，将 Transwell 上室中的培养基更换为 1 毫升接种物，并将培养板放回细胞培养箱中以促进细菌侵袭，每天更换每孔中的全部培养基。