疟疾-HIV共感染体外细胞培养模型的建立

从一个含有源自人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者的人外周血单个核细胞（PBMCs）的多孔板开始。

PBMC 包含多种免疫细胞，其中包括整合了前病毒 DNA 的 HIV 感染性 CD4 阳性 T 细胞。

将表达疟原虫来源抗原的恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）感染红细胞（PfRBCs）与未感染的红细胞混合后接种于各孔中。

孵育期间，恶性疟原虫感染的红细胞（PfRBCs）的抗原与免疫细胞的受体相互作用，激活免疫细胞并释放细胞因子。

这些细胞因子在CD4 T细胞中触发下游信号传导，启动HIV前病毒DNA的转录以及新病毒RNA的合成。

病毒RNA和HIV蛋白形成病毒颗粒，这些颗粒出芽并感染新的CD4 T细胞，从而扩散HIV感染。

进行性 HIV 感染会破坏细胞因子的分泌，损害针对疟原虫感染红细胞（PfRBCs）的免疫反应，从而导致疟疾感染持续存在。

随着时间推移，受感染的红细胞会释放出寄生虫，侵入新的红细胞，使疟原虫不断增殖，从而建立疟疾与HIV共感染的细胞培养模型。

为建立共感染培养体系，首先将1 × 10⁶个新分离的HIV阳性与HIV阴性外周血单个核细胞（PBMC）分别加入24孔板中，每孔加入100微升RPMI-S+培养基。再向每孔中加入400微升RPMI-S+，使每孔总体积达到500微升。

然后，每孔以500 µL的总体积，设三个重复，向HIV感染和未感染细胞中分别加入3 × 10⁶个未感染的红细胞或3 × 10⁶个寄生虫感染的红细胞。将共感染培养板放入细胞培养孵箱中。

随后，在适当的实验时间结束后，离心收集细胞沉淀，并从每个孔中取出700 µL培养上清液。将上清液离心以去除任何碎片。然后，根据需要对样品进行分装，标记试管，并于-20 °C或更低温度下冷冻保存，以备后续分析。