通过显微注射技术在肠道类器官中建立寄生虫感染的方法

取一个人类肠道类器官培养物。这些类器官由面向中央管腔的上皮细胞构成，模拟了 体内 结构

取含有新月形子孢子（感染性阶段）的显微注射器 微小隐孢子虫， 一种寄生虫.

将子孢子注入类器官腔内。

寄生虫凝集素可结合上皮细胞上的特异性碳水化合物，促进其进入营养寄生泡。

被宿主细胞内化的寄生虫转变为滋养体——即摄食阶段，该阶段获取营养并进行无性繁殖，形成包含裂殖子（即侵袭性形态）的Ⅰ型裂殖体。

释放的裂殖子会感染邻近的上皮细胞，并发育形成含有裂殖子的Ⅱ型裂殖体。

裂殖子进入邻近细胞，并分化为小配子体或大配子体——分别为雄性和雌性生殖阶段。

微配子母细胞经过分裂形成微配子，后者被释放到液泡外。

一个微配子使大配子母细胞受精，产生一个合子。

合子经过分裂，形成含有子孢子的卵囊。当子孢子释放后，会重复感染周期。

收获类器官以评估感染进程。

为了将寄生虫显微注射到三维类器官的顶端一侧，首先使用微电极拉制仪制备玻璃注射毛细管。用镊子将毛细管尖端剪至9至12微米直径，以便子孢子或若选择直接注射卵囊时的卵囊顺利流动，并使用微量加样吸头将每根毛细管吸入含快绿染料标记的卵囊或子孢子悬液。

然后，将第一根充满子孢子的毛细管装入显微注射仪中，使用倒置显微镜在5倍放大倍数下，以恒定压力向每个类器官显微注射100至200纳升的悬浮液。