一种通过喷雾接种法在水稻叶片上建立真菌感染的技术

取一个培养皿，将水稻叶片的片段置于湿润的滤纸上，以防止干燥。

取病原真菌Magnaporthe grisea的分生孢子悬液  —— 一种生殖孢子 —— 喷洒于叶片片段上，并在黑暗潮湿条件下培养。

水分促使分生孢子释放黏液，从而促进其附着在叶片表面。

分生孢子延伸出芽管，其顶端分化为圆顶状的附着胞。

侵染垫内部的高溶质浓度产生膨压，形成侵入钉。

细小的栓状突起将由膨压介导的力集中于叶片的微小区域，从而导致其穿透进入叶细胞。

菌丝突起分化为侵入性菌丝以获取营养。

在荧光灯下孵育叶片片段以促进真菌生长。

菌丝在受感染的细胞内分枝，并通过胞间连丝侵入邻近细胞。

真菌分泌毒素诱导坏死，导致叶片出现病斑。通过评分病斑来评估感染严重程度。

使用无菌手术剪将三层滤纸剪成直径8厘米的圆形。将滤纸圆片放入100毫米的无菌塑料培养皿中。向每个培养皿中加入适量的去离子蒸馏水，以浸透滤纸为宜。然后，在每个培养皿中放置两根无菌牙签，间距为2至3厘米。

播种两周后，通过切割水稻植株茎的下部来采集叶片。使用恒温培养箱，在25摄氏度条件下将M. grisea菌株在OTA平板上培养四天。然后，用移液器向每个平板中加入2毫升去离子蒸馏水。使用接种环，将野生型和突变型菌株的菌丝刮入菌丝碎片中。

收集菌丝残体，并将其转移至一个新的OTA平板中。然后，在洁净工作台上将菌丝残体干燥。向培养有菌丝的培养皿中加入2毫升蒸馏去离子水，用无菌棉签轻轻刮取分生孢子。将分生孢子悬浮液通过两层镜头纸过滤，并将滤液转移至一个新的50毫升离心管中。随后，在5,000 × g 条件下离心5分钟。

离心后，弃去上清液，用 Tween 20 溶液重悬沉淀，使孢子浓度达到每毫升 20,000 个分生孢子。将悬浮液倒入手持喷雾器中。然后，将约 10 毫升的分生孢子悬浮液喷洒到两周龄水稻植株的叶片上。用 Tween 20 溶液喷洒对照植株的叶片。

此后，将叶片置于黑暗湿润的盒子中孵育 24 小时。接着，将叶片转移到有荧光灯照射的湿润培养室中，继续孵育 12 小时。