成年斑马鱼口服插管给药实验方法

首先，将无菌的口腔插管装置加载含有纳米结构细胞因子包涵体 ——一种实验性纳米颗粒的悬浮液。

将一条禁食且已麻醉的斑马鱼放置于湿润的塑料托盘上。

稳稳地握住鱼，并使用连接在口腔插管装置上的移液器吸头轻轻打开其口腔。

小心地将针从鱼的口腔插入，沿食道向下推进。

当移液器吸头通过鳃部并遇到轻微阻力时，应避免进一步插入。

轻轻地将纳米颗粒注射到鱼体内。

注射后，这些细胞因子纳米颗粒会直接接触斑马鱼消化道内壁的上皮细胞。

这些细胞通过内吞作用摄取纳米颗粒。

在上皮细胞内，囊泡经历细胞内加工以释放细胞因子纳米颗粒。

这些细胞因子纳米颗粒进入下方的结缔组织，与常驻免疫细胞相互作用，并触发细胞内信号传导事件，从而引发由细胞因子驱动的免疫反应。

将约1厘米长的细硅胶管套在31号鲁尔锁针头上。剪下无菌10微升滤芯吸头的细端，套在硅胶管外作为护套。

首先，将针头装置连接到一支100微升的鲁尔锁型注射器上。实验前一晚，先将鱼类转移至实验用鱼缸中。充分涡旋振荡已配制好的纳米颗粒溶液，并吸取所需体积的悬浮液。将鱼类安全麻醉后，使用渔网迅速将其转移至湿润的塑料托盘中。

将动物水平放置，使其朝向针头。用一只手小心托住鱼，用受保护的针头撑开鱼口，然后轻轻将针头沿食道插入，至距口部开口约 1 厘米处。

很难看清针头应插入多深，这需要通过练习来掌握。当针头遇到阻力时，你会有所感觉，然后通过调整针头的角度，可以将装置再插入得更深一些。

缓慢将纳米颗粒悬浮液注入鱼体内，确保悬浮液不会从鳃部或口部流出。注射完成后，轻柔地拔出针头，将鱼放入恢复缸中。在鱼恢复期间，密切观察其是否有任何异常表现。待鱼完全恢复后，将其放回其中一个实验缸中。