在免疫功能健全的啮齿类动物模型中支气管内接种Streptococcus pneumoniae

获取一个无菌的插管装置，该装置由连接至金属针头的聚乙烯管组成的金属套管构成。

将含有肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）的注射器连接到针头上，并填充管路。

接下来，将一只麻醉后的免疫功能健全的大鼠置于仰卧位。

将金属导管的自由端插入大鼠口腔，推进至气管，朝向左支气管并进入左肺至适当深度。

将导管推进至套管末端，并将细菌悬液注入左肺叶。

细菌的荚膜和表面相关酶可防止细菌被黏液捕获。此外，Streptococcus pneumoniae 能够附着于支气管上皮细胞的表面受体，促进其内吞作用并释放至基底外侧表面。

细菌分泌毒素，损害上皮细胞和屏障，从而引发免疫反应。

然而，Streptococcus pneumoniae 已经进化出多种策略以逃逸宿主免疫应答并建立肺部感染。

将一张洁净的一次性垫子放置在靠近水浴的工作台面上。

为准备操作台和插管装置，首先根据文本方案对金属套管和聚乙烯管进行灭菌，然后将其连同玻璃储存管一并转移至操作台。接着，取下储存管的帽盖，将套管的手柄端滑入储存管的开口端。使用无菌镊子从烧杯中取出一段聚乙烯管，将其穿过无菌金属套管内部，确保其可自由移动。用不褪色笔在预定位置标记引导线。

接下来，将无菌一次性25号针头套在聚乙烯管的游离端，将针头向管内推进数毫米以确保连接紧密。然后，抽取无菌生理盐水注入一支新的无菌1毫升一次性注射器中。将该注射器连接到已安装在聚乙烯管上的针头，推动注射器活塞，使全部生理盐水通过管道冲洗一遍。

将使用过的注射器丢弃至锐器容器中。然后，从水浴中吸取基于琼脂的接种物，注入新的无菌一次性1毫升注射器内。重新安装25号针头和导管，通过推动推杆使琼脂流经导管，直至导管完全充满琼脂为止。

根据文本方案将大鼠麻醉后，将动物仰卧于一次性垫上，头部朝右，尾部朝左。接着，将金属导管的自由端插入动物口腔内。旋转导管，使自由端向上倾斜，并轻轻向前推进进入气管，同时以轻微扭转动作小心绕过喉部结构。

通过轻轻前后滑动套管数次，同时用左手食指触诊气管软骨环，确认套管插入的是气管而非食管。

为确保导管插入气管而非食管，应轻微前后移动导管，并感受气管环的阻力。如果导管顺畅滑入喉咙且无法触及阻力，则应取出装置并重新尝试。

当插管到达气管分叉处（即气管分为左、右支气管的位置）时，轻轻向动物左侧扭转，以确保插管进入左支气管。

常见的错误是接种物未插入肺部足够深的位置，这可能会阻塞气道并抑制呼吸。当套管调整到合适角度时，应能顺利滑入左支气管，并平稳推进至适当深度。

推进金属套管，直至其末端到达左肺一半至四分之三深度的位置，利用先前标记的参考线确认已达到适当深度。保持金属套管位置不变，根据聚乙烯导管上预先标记的参考线，将导管向前推进数毫米，确保其仅伸出金属套管末端而不会刺穿肺组织。

将两根导管放置到位后，使用连接的注射器向左肺大叶深处注入100微升琼脂悬浮液。将导管向外抽出数毫米，轻柔地取出完整的插管装置。将其放回玻璃储存管中，并将动物转移至新的笼子中恢复。