一种在大鼠中诱导慢性实验性自身免疫性干眼症的技术

取先前用含有泪腺来源自身抗原和外源抗原的抗原-佐剂乳剂免疫过的大鼠。

重新注射乳剂，并腹腔注射百日咳毒素，以确保T细胞最大程度地活化。

活化的细胞分化为循环效应记忆T细胞（TEMs）和组织驻留记忆T细胞（TRMs）。部分TRMs存在于眼表组织中。

经过设定的时间间隔后，将抗原注射至穹隆部结膜下和泪腺，以诱导局部炎症反应。

结膜下抗原呈递细胞，APCs, 向组织驻留记忆T细胞呈递抗原，触发细胞因子释放。

细胞因子诱导结膜上皮细胞释放趋化因子，从而招募 TEMs。

抗原提呈细胞重新激活浸润的效应记忆T细胞，触发促炎性细胞因子的释放。

细胞因子可导致产生黏蛋白的结膜杯状细胞死亡，从而降低黏蛋白水平，引起泪膜不稳定。

细胞因子可诱导泪腺细胞死亡——减少泪液分泌——并刺激角膜上皮细胞产生基质金属蛋白酶，从而损伤角膜。

评估大鼠是否存在表明干眼症成功诱导的临床特征。

在第0天，将含有1毫克泪腺提取物、200微克卵清蛋白和完全弗氏佐剂的乳剂分装至1毫升鲁尔锁扣注射器中，每管200微升，并为注射器安装27号针头。

在不使用麻醉的情况下，将乳剂皮下注射至大鼠尾根部。随后在第14天，以相同方式注射200微升相同抗原与不完全弗氏佐剂的混合物。同一天，以100微升PBS溶液腹腔注射300纳克百日咳毒素。

第48天，称取所需量的卵清蛋白，溶于磷酸盐缓冲液（PBS）中，然后将卵清蛋白与本视频前面制备的已解冻泪腺提取物混合，制成含有1毫克/毫升卵清蛋白和1毫克/毫升泪腺提取物的抗原溶液。

麻醉大鼠后，向眼部穹窿结膜下注射 5 微升抗原，然后向泪腺注射 20 微升抗原。