自然杀伤细胞在趋化刺激下迁移能力的测定

首先，在多孔板中加入趋化因子（如趋化因子蛋白）。

将适当孔径的Transwell小室放入孔板中。向小室上层加入自然杀伤（NK）细胞悬液，并进行孵育。

少量趋化因子分子穿过膜并结合自然杀伤细胞受体。这会触发信号通路，促进细胞骨架改变，导致细胞向较低腔室中趋化因子浓度较高的区域定向移动。

孵育后，将下室中迁移的细胞固定体积转移至荧光激活细胞分选（FACS）管中。加入预定数量的荧光计数微球，进行基于FACS的细胞计数。

使用以下公式，确定样本中迁移的 NK 细胞的绝对数量。

点图根据荧光和散射特性，将计数微球和细胞分为不同的区域，显示其各自的数量。

为了检测自然杀伤细胞（NK细胞）在趋化刺激下的迁移能力，从70%至80%汇合度的培养物中收集人NK细胞，并将细胞重悬于无血清NK细胞培养基中，浓度为2.5 × 10⁶ 个细胞/毫升。接着，每孔加入600微升含有目标NK细胞趋化因子的无血清培养基。

将一个直径为6.5毫米、孔径为5微米的培养小室放入每孔培养基中。然后，向每个小室的上层加入100微升NK细胞，并将培养板置于细胞培养箱中孵育4小时。

孵育结束后，将每个孔底部所有非贴壁迁移细胞全部转移至单独的5毫升流式管中，并向每管加入15微升预先确定数量的流式细胞术计数微球。然后，使用流式细胞仪按照标准流式细胞分析方案检测每个细胞样本，并利用公式计算迁移的NK细胞的绝对数量。