检测血清中针对目标抗原抗体的血凝抑制试验

从 V 形底多孔板开始，在检测孔中加入来自接种过流感疫苗的人的稀释血清，该血清含有流感特异性抗体。

在检测孔和对照孔中加入病毒血凝素——一种流感特异性抗原。

孵育过程中，检测孔内的流感病毒特异性抗体与抗原结合，形成复合物；而在对照孔中，抗原保持未结合状态。

将禽类红细胞或红细胞加入孔中孵育。

在对照孔中，游离抗原与红细胞表面特异性识别病毒血凝素的受体结合，导致红细胞聚集，发生血凝现象，并在孔底形成紧密的凝集图案。

然而，在检测孔中，抗原-抗体复合物的存在以及游离抗原的缺失会抑制血凝反应，使红细胞沉降于孔底。

检测结束后，倾斜培养板。对照孔显示出微小、致密的圆形图案，外观模糊，表明发生了血凝集反应。

相比之下，检测孔显示出类似泪滴状的弥散图案，提示存在血凝抑制。

首先，用相应的实验信息标记96孔微孔板。然后，将板子垂直放置，使用多通道移液器向除底部回滴定行第一孔外的所有孔中各加入25 µL PBS。向回滴定行的第一孔中加入50 µL新配制的目标抗原溶液，随后向顶部10行的第一孔中各加入25 µL经RDE处理的血清样本。

向第11行第一孔中加入25微升相应的抗血清作为阳性对照。然后，将每行第一孔中的25微升液体转移至后续各孔，进行连续两倍稀释。每次稀释步骤中，上下吹打10到15次，并从最后一孔弃去25微升液体。

接下来，向第1至第11行的每孔中加入25 µL抗原溶液，向回滴定行的每孔中仅加入25 µL PBS。轻轻在四个侧面上各轻敲酶标板10次以混匀，并在室温下覆盖孵育30分钟。孵育结束后，向每孔中加入50 µL红细胞溶液，并通过进一步轻敲混匀酶标板。然后再次覆盖酶标板，并根据所用物种按照表格中所述条件孵育红细胞。

将红细胞加入到孔板后，需根据检测中所用血液类型遵循适当的孵育时间。孵育时间过短或过长均会导致对结果的错误解读。

孵育结束后，将96孔板倾斜90度，持续25秒，观察血凝现象，并在板子仍处于倾斜状态时，根据96孔板的打印图示，记录每个孔的结果。