0 次观看 • 4:29 分钟 • July 8th, 2025
从含有肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae）悬液的多孔板开始。
引入靶向细菌表面抗原的抗体，该抗体可与细菌表面抗原相互作用。这会使细菌被抗体包裹，形成可被免疫系统识别的调理细菌。
将人外周血淋巴细胞来源的中性粒细胞接种至孔板中，并加入含有补体蛋白的兔血清。
孵育过程中，补体蛋白（如 C3b）会沉积在细菌表面，从而在抗体调理的细菌表面形成额外的调理素包被，增强中性粒细胞对细菌的识别。
中性粒细胞上的特异性表面受体与细菌上的调理素相互作用，促进通过吞噬作用摄取细菌。
在吞噬体内，中性粒细胞降解所吞噬的细菌，从而降低缓冲液中的细菌数量。
孵育后，取稀释的共培养液点种于血琼脂平板上，使单个细菌形成菌落。
比较经调理素处理的细菌与未经处理的细菌的菌落数量。
经调理素处理后菌落数量减少，表明细菌杀伤效果增强，提示调理吞噬杀伤成功。
解冻一管菌种。在6,000 × g离心收集菌体 g 孵育两分钟，然后按照前一步骤中确定的最佳稀释比例，用OBB重悬细胞沉淀。将10微升重悬的细菌稀释液加入至圆底96孔细胞培养板的每个孔中。随后，向每个实验孔中分别加入20微升适当的抗体或药物处理溶液，每组设两个复孔。
对照孔中使用 1X PBS 或 OBB，具体选择取决于处理孔所用的缓冲液。将样品板在室温下以约 90 RPM 的速度振荡一小时。
收集三天前经 DMF 处理的 HL60 分化细胞，于 500 × g 离心 3 分钟以沉淀细胞。弃去上清液，并用至少 10 毫升的 1×PBS 重悬沉淀。于 500 × g 再次离心 3 分钟以沉淀细胞。弃去上清液，将细胞重悬于 OBB 中。
以终体积 1:5 的比例加入无菌未稀释的幼兔血清。细菌培养 1 小时后，将每份样品等分至两个重复孔中，分为两组。随后，向每组实验孔中加入 50 µL HL60 补体混合液，向仅含细菌的孔中加入 50 µL OBB。在 37 °C 下振荡 96 孔板 1 小时。
接种样品时，用OBB将每个孔的样品稀释至最终体积为1:5，使每个样品的体积至少为50微升。接着，用移液器将每种样品各50微升直接点样到细菌培养板的指定区域，确保各样品之间有足够的间距。盖好培养板，于室温下静置约15分钟，使样品干燥。
倒置平板，在30摄氏度下培养过夜。或者，将平板置于厌氧罐中培养，以检测无氧条件是否影响细菌生长或用于形态学对照。过夜培养后，计数每个指定样品区域的菌落数量，并通过将每组活细胞数与相应对照组进行比较来分析数据。
首次建立该技术时，最困难的环节可能是优化细菌储备液的起始菌落形成单位（CFUs），以及确保 HL60 细胞有效分化。