一种评估肿瘤特异性抗体在体内定位的技术

取人卵巢癌细胞悬液。加入基底膜基质培养基，并置于冰上以防止凝胶形成。

将混合物装入注射器中，皮下注射到无胸腺裸鼠体内。待基质发生凝胶化后拔出针头，以防止混合物被挤出。

免疫缺陷小鼠缺乏免疫反应，可维持所注射细胞的存活能力。凝胶中的细胞外基质蛋白和生长因子提供促进生长的信号，有助于肿瘤形成。

肿瘤细胞表面过度表达叶酸受体α-1（FOLR1）。

取FOLR1特异性抗体，加入荧光染料并孵育，使染料与抗体发生偶联。

将标记的抗体静脉注射到麻醉的荷瘤小鼠体内。

抗体到达肿瘤 通过 循环并与肿瘤细胞上的FOLR1结合，从而在细胞表面进行荧光标记。

执行 体内 荧光成像。激发后，染料发射荧光，有助于评估抗体在肿瘤中的定位。

使用透析盒在1升偶联缓冲液中透析0.5毫升抗体。4小时后，将透析盒转移至新鲜缓冲液中，继续透析过夜。为建立偶联反应，在总体积为500微升的体系中，每1毫克抗体加入0.03微克IRDye 800CW。

将混合物在 20 摄氏度下孵育两小时。然后，通过在 PBS 中进行充分透析来纯化标记的偶联物。通过测定染料在 780 纳米处的吸光度以及蛋白质在 280 纳米处的吸光度，估算标记程度。

为建立小鼠异种移植模型，轻柔地提起动物的皮肤并将其与下方的肌肉层分离。使用26号针头将100 µL细胞悬液缓慢注射到皮下。拔出针头前等待数秒钟，使基底膜基质液与细胞在皮下形成半固体凝胶样结构，从而防止混合物从注射部位溢出。

进行 体内 成像，注射染料标记的抗体 通过 尾静脉。麻醉小鼠后，检查其对足底反射无反应，并通过应用温水使静脉扩张。使用带有26号针头的1毫升胰岛素注射器，注射100微升体积中含有25微克标记抗体的溶液。作为阴性对照，使用不靶向癌细胞的非特异性IgG同型抗体，进行标记并注射。

在抗体注射后 8、24 和 48 小时进行 体内 成像。在成像软件中，点击 初始化。确认载物台温度为 37 摄氏度。在控制面板中，通过成像向导设置荧光成像，并将激发波长设为 773 纳米，发射波长设为 792 纳米。

将麻醉后的小鼠转移至成像室，并使用鼻罩将其固定在成像区域。准备就绪后，点击控制面板上的采集按钮开始图像采集，然后点击自动曝光。生成的图像为荧光信号与摄影图像的叠加，光学荧光强度以计数或光子数为单位显示。