0 次观看 • 3:54 分钟 • July 8th, 2025
取一悬液的Jurkat细胞——T淋巴细胞白血病细胞。
将一份样品与细胞活力染料混合，并确保有足够的活细胞数量。
将细胞接种于培养皿中，并照射所需时长的紫外线C（UVC）辐射。
UVC 穿透细胞并被 DNA 吸收，形成嘧啶光产物。
照射后，将细胞进行孵育。强烈的UVC介导的DNA损伤会启动内在凋亡通路，激活线粒体外膜上的促凋亡蛋白。
活化的蛋白质发生寡聚化，形成膜孔，并将细胞色素 C 从膜间隙释放到细胞质中。
细胞色素C与凋亡蛋白酶激活因子-1形成复合物，构成凋亡体复合物。该凋亡体可激活胱天蛋白酶（caspases），从而引发细胞凋亡。
加入荧光素标记的膜联蛋白V以标记细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（凋亡细胞标志物），并加入碘化丙啶，后者可透过受损的细胞膜进入细胞并标记DNA。
通过流式细胞术，检测经 annexin V 标记的早期凋亡细胞以及双重染色的晚期凋亡细胞。
将Jurkat T细胞接种于基础细胞培养基中，在37摄氏度、5%二氧化碳条件下进行培养，培养基成分根据文献说明添加。Jurkat T细胞是一种悬浮细胞系，可通过每三天传代至预热的培养基中进行维持。
通过传代后培养3至4天，使细胞生长至90%融合度，以制备凋亡细胞。为获得本实验方案所需的足够细胞数量，需在五个T75培养瓶中培养细胞。待细胞准备就绪后，吸除每个培养瓶中的约24毫升培养液，并将其转移至50毫升锥形管中。使用台盼蓝染色法和血细胞计数板对细胞进行计数。
将细胞在271 × g 条件下离心5分钟，沉淀细胞，弃去上清液。随后，将细胞重悬于培养基中，调整浓度至每毫升含300万个细胞。每皿加入5毫升细胞悬液，分装至100 mm × 20 mm的组织培养皿中。
准备约九个培养皿。留出其中一个培养皿作为未暴露的对照组，其余培养皿进行紫外线照射。通过按下能量按钮并使用数字键盘输入“600”，将紫外交联仪设置为正确的能量水平。除对照组外，对所有含细胞的培养皿进行照射，注意在紫外线照射期间移除组织培养皿的顶部盖子。
然后，将所有培养皿置于细胞培养箱中，在37摄氏度及5%二氧化碳条件下孵育4小时。孵育结束后，将所有经照射的细胞收集至一个50毫升的锥形管中，于271 × g 离心5分钟，形成细胞沉淀。弃去上清液，将细胞重悬于24毫升无菌磷酸盐缓冲液（PBS）中。再次离心该管，并移除上清液。