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免疫学
0 次观看 • 3:43 分钟 • July 8th, 2025
取一支含有新鲜抽取的人类血液的试管,并加入裂解缓冲液。
缓冲液中的去垢剂可穿透细胞膜,裂解细胞并释放细胞内的核酸(NAs)和核酸酶。
缓冲液中的变性剂可使核酸酶变性,从而防止核酸降解。
加入磁性玻璃颗粒(MGPs)——即包被二氧化硅的磁性颗粒——并充分混匀。
缓冲液的低pH值使硅胶质子化,从而使微玻璃颗粒(MGPs)表面带正电荷。
带负电荷的核酸通过静电作用结合到带电表面,形成核酸-微珠复合物(NA-MGP复合物)。
在磁场作用下,NA-MGP 复合物在试管的一侧聚集。
弃去含有细胞碎片和蛋白质的上清液。
通过将核酸-磁性玻璃粉复合物重悬于洗涤缓冲液中,施加磁场收集复合物,并弃去含有残留污染物的上清液,进行多次洗涤步骤。
用洗脱缓冲液重悬复合物。高pH值会破坏核酸-磁性基因探针(NA-MGP)之间的相互作用,从而释放出核酸。洗脱得到的核酸可直接用于后续分析实验。
为了从采集的血液中纯化核酸,再次通过手动倒置真空管5到10次,充分混匀管内液体。将制备好的MGPs分装液直接倒入血液采集管中,然后从一支未使用的血液采集管上取下新管盖,盖在含有样本的管子上。用手指按住管盖以确保管子完全密封,再通过倒置混匀5到10次。
将试管放入磁力架中,并用手指按住管盖以确保管口紧闭。然后,将装有试管的磁力架反复翻转数次,使磁性颗粒充分分散,防止其在磁铁一侧的管壁上聚集。打开管盖,使用一次性移液器将管内液体转移至50毫升收集管中并弃去。
将预装的WB1等分试样直接倒入采血管中,并盖紧管盖。用手轻轻混匀5至10次。然后,将磁珠用磁铁吸附至管壁一侧,吸弃上清液。将磁珠重悬于预装的WB2等分试样中。随后弃去溶液,并用预装的WB3等分试样重复上述步骤。
最后,将离心管从磁力架上取下,直接将制备好的EB等分试样倒入血液采集管中。盖上管盖,用手指轻弹5至10次,使磁性颗粒充分重悬。最后,使用1.5毫升一次性移液器吸取一滴重悬的磁性颗粒,转移至下游核酸扩增反应体系中。