自然杀伤细胞介导的细胞毒作用检测样本制备用于流式细胞术分析

从含有自然杀伤（NK）细胞和荧光标记靶细胞的细胞沉淀开始。

将沉淀重悬于适当的培养基中，并进行孵育。

NK细胞相互作用 通过 表面黏附蛋白，与靶细胞形成免疫突触。

这会启动NK细胞信号传导，释放含有穿孔素和颗粒酶的细胞毒性颗粒进入突触。

穿孔素是一种成孔蛋白，可在靶细胞膜上形成通道，使颗粒酶进入细胞质。

颗粒酶是一种丝氨酸蛋白酶，可与细胞内蛋白相互作用，激活靶细胞中的凋亡通路。

现在，加入碘化丙啶荧光染料。

染料通过死细胞受损的细胞膜进入细胞，并通过嵌入DNA的碱基对之间与DNA结合。

因此，死细胞表达双荧光染料，而活细胞表达单荧光染料。

样本已准备好进行流式细胞术，通过定量死亡和存活的靶细胞数量来评估自然杀伤细胞诱导的细胞毒性。

制备细胞毒性实验样品时，首先根据需要为每个样品和/或参与者标记1.5毫升离心管，并将适当比例的NK细胞和DiO标记的K562细胞移液至各管中。

通过离心收集细胞，并小心移除上清液，避免扰动细胞沉淀。接着，将细胞混合物重悬于500 µL不完全NK细胞培养基中，并在每管中加入5 µL碘化丙啶对细胞进行标记。

收集细胞 通过 再次离心，将冷培养物在37摄氏度下孵育两小时。孵育结束后，在相同的离心条件下离心细胞，并将沉淀重悬于25微升新鲜且完全的NK细胞培养基中。