一种用于检测化学诱导人肺组织精准切片细胞毒性的实验方法

取一个含有保持天然肺微结构的人源精准切割肺片的多孔板。

移除培养基。向孔中加入梯度增加的测试试剂浓度，并进行孵育。

根据其细胞毒性潜力，测试试剂会破坏细胞膜，诱导细胞死亡，从而减少切片中的活细胞数量。

孵育结束后，移除培养基。将脑片浸入含有水溶性四唑盐（WST-1）和电子偶联试剂的培养基中。

孵育。在代谢活跃的细胞中，质膜电子传递系统将细胞内NADH的电子转移至胞外电子偶联试剂，使不能透过细胞膜的染料WST-1还原为稳定的深黄色水溶性甲臜。

孵育结束后，轻轻振荡培养板以均匀分散甲臜，随后将其转移至多孔板中。

使用微孔板读数仪测量甲臜的吸光度，以指示组织的活性。

四氮唑吸光度的降低与受试试剂浓度相关，表明肺组织切片活力下降，从而证实了受试试剂的细胞毒性 。

为配制工作液的混合液，每孔加入25微升WST-1试剂和225微升培养基。随后，每孔加入250微升WST-1混合工作液，在37摄氏度下孵育1小时。孵育期间应确保WST-1试剂完全覆盖PCLS组织。

随后，将培养板置于摇床上，以200 rpm的速度轻轻振荡30秒，确保WST-1试剂充分混匀。然后，用移液器将24孔板中每孔的上清液各100 µL重复两份转移至新的平底96孔板中。使用酶标仪在450 nm波长下测定各孔的吸光度，并从450 nm处的吸光度值中减去630 nm参考波长处的吸光度值。