通过乳酸脱氢酶检测法评估肺组织切片中的细胞毒性和膜完整性

从经细胞毒性试剂（如表面活性剂分子）处理的多孔板中的人源精准切割肺片（PCLS）开始。

表面活性剂插入细胞的脂质双分子层中，使其疏水尾部与脂质双分子层的疏水核心相互作用。

因此，脂质分子的有序排列受到干扰，导致胶束的形成。

这会破坏细胞膜的完整性，导致细胞内含物（包括乳酸脱氢酶或LDH，这是细胞膜损伤的常见指标）泄漏。

收集含有释放的乳酸脱氢酶（LDH）的上清液。

加入含有乳酸底物、NAD+、二氢硫辛酸脱氢酶和四唑盐的LDH检测反应混合液，并进行孵育。

LDH 将乳酸氧化为丙酮酸，同时将 NAD+ 辅酶还原为 NADH。

脱氢酶利用 NADH 将四唑盐还原为甲臜 ——一种有色产物。

可通过甲臜生成所指示的乳酸脱氢酶（LDH）活性来测定表面活性剂诱导的细胞毒性。

在将PCLS与测试试剂孵育或不孵育后，将50微升上清液及其重复样转移至新的96孔板中。这样可从24孔板的每个处理孔中生成复孔。

在进行检测前，立即配制LDH试剂的工作液：将125微升催化剂溶液与6.25毫升染料溶液充分混合，用于96孔板。然后，向每个已含有50微升上清液的孔中加入50微升上述配制好的主工作液，将板在室温避光条件下孵育20分钟。随后，使用酶标仪在492纳米处测定各孔的吸光度，并从492纳米处的吸光度值中减去630纳米处的参考吸光度值。