一种基于荧光的检测方法：利用基因工程淋巴细胞筛选免疫调节化合物

从一个含有转基因小鼠来源的T淋巴细胞悬浮液的荧光兼容多孔板开始。

这些淋巴细胞含有绿色荧光蛋白或GFP表达盒，其表达由T细胞受体（TCR）与免疫调节化合物结合所调控。

用含有不同潜能免疫调节化合物的溶液处理每个孔。

孵育期间，免疫调节化合物与T淋巴细胞上的T细胞受体（TCRs）相互作用。

TCR 与刺激性化合物的相互作用会触发基因盒的激活，从而提高 GFP 的表达水平。

相比之下，TCR 与抑制性化合物的相互作用会抑制基因盒并降低 GFP 的表达。

接下来，用核酸荧光染料覆盖细胞以染色细胞核。

离心培养板以沉淀细胞，确保荧光测定的准确性。

在荧光显微镜下，活的T淋巴细胞显示出两种荧光信号，分别对应于细胞核和绿色荧光蛋白。

增强的绿色荧光表明T淋巴细胞被成功激活，而微弱的细胞内绿色荧光信号则证实了免疫调节化合物对T淋巴细胞的抑制作用。

进行小分子高通量筛选时，在384孔板中每孔接种40微升细胞，并在细胞培养孵育箱中，用选定的药物或对照溶剂对相应孔进行指定时间的处理。

在进行GFP分析前30分钟，使用适当浓度的Hoechst溶液对细胞进行染色，并通过轻柔吹打充分分散染料。当所有孔均已染色后，离心培养板以使细胞沉降至孔底，并在室温下静置15分钟。

根据制造商的说明加载微孔板。然后，将物镜设置为40倍或更高倍数。将相机4设置用于紫外灯，再将相机1设置用于488激光。将微孔板载入高内涵筛选系统。接下来，设置自动共聚焦高内涵筛选系统，每孔读取6至10个视野，每个视野在488纳米和紫外光下各进行两次连续读数。